[发明专利]一种链霉亲和素磁珠及其制备方法

权利要求书

1.一种链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一，羧基磁珠的活化，包括（1）取羧基磁珠原液于EP管中，置于磁力架上磁珠分选两分钟，去除保存液；（2）加入 0.01M 磷酸盐缓冲液清洗磁珠两次，磁珠分选去上清；（3）加入现配现用的5mg/mL NHS和5mg/mL BOP溶液37℃旋转孵育2小时，活化磁珠表面的羧基；（4）活化后磁珠分选2min，并加入0.01M 磷酸盐缓冲液清洗磁珠3次，去除活化剂；

步骤二，羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联，包括（1）将步骤一活化后的羧基磁珠放于偶联缓冲液中,加入链霉亲和素，室温旋转孵育至少3小时，磁珠分选去上清；（2）加入0.01M磷酸盐缓冲液清洗磁珠三次，加入500uL 0.01M 磷酸盐缓冲液重悬磁珠；所述偶联缓冲液的配制如下取链霉亲和素、BOP试剂加入硼酸盐缓冲液，其中硼酸盐缓冲液是由10% 0.05 M的 Na₂B₄O₇ 溶液和90% 0.2 M 的H₃BO₃ 溶液配制而成，最终pH 值为 7.4，灭菌后4℃保存备用；

步骤三，物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；

步骤四，链霉亲和素磁珠的淬灭及保存。

2.如权利要求1所述的一种链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤三中物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测的方法如下：（1）将步骤二中得到的偶联过链霉亲和素的磁珠放入微量透析装置,所述透析装置截留分子量大于70K，透析液为0.01M 磷酸盐缓冲液，期间每4小时换透析液一次，磁力搅拌透析24h；（2）透析完成后，将透析装置放于离心管中，1500g离心1分钟；（3）收集离心液做Western blot，用HRP标记的生物素作为检测抗体，检测物理式附着结合的链霉亲和素是否从磁珠上完全剥离；（4）将剥离后的磁珠与链霉亲和素偶联缓冲液再次孵育，填补剥离后空缺的—COOH位点，孵育后再用0.01M 磷酸盐缓冲液进行三次磁珠分选清洗。

3.如权利要求1所述的一种链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤四中链霉亲和素磁珠的淬灭及保存的方法如下：（1）在步骤三获得的链霉亲和素磁珠中加入淬灭缓冲液，轻柔混合，在旋转器上孵育45分钟；（2）用磁力架收集磁珠，去除上清；（3）添加保存液进行保存；其中，淬灭缓冲液为0.638mL乙醇胺加10mL 磷酸盐缓冲液 配制而得；保存液为 1g酪蛋白、2g蔗糖加入100mL 磷酸盐缓冲液配制而得。

4.一种链霉亲和素磁珠，其特征在于，由权利要求1-3任一项所述的一种链霉亲和素磁珠的制备方法制备得到。