[发明专利]多酚氧化酶的应用及合成黄酮的方法

权利要求书

1.多酚氧化酶在催化如式Ⅰ结构化合物氧化生成如式Ⅱ结构化合物中的应用，所述多酚氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示；

所述式Ⅰ、式Ⅱ的结构式如下：

式Ⅰ、式II中的R为氢或羟基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述多酚氧化酶的核苷酸序列如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。

3.一种合成黄酮的方法，其特征在于，具体方法如下：将如式Ⅰ结构化合物为底物在含有多酚氧化酶的条件下反应生成如式Ⅱ结构化合物，所述多酚氧化酶的氨基酸序列如SEQID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示；

所述式Ⅰ、式Ⅱ的结构式如下：

式Ⅰ、式II中的R为氢或羟基。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述多酚氧化酶为重组多酚氧化酶或来自于表达多酚氧化酶的工程菌。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述重组多酚氧化酶由含有SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示序列的重组表达载体转化宿主，经诱导表达后，纯化得到。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体由SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示序列分别通过Gateway克隆技术中的BP反应连接到载体pDONR207中，获得中间载体，然后将中间载体和表达载体pDEST17利用Gateway克隆技术中的LR反应连接获得重组表达载体；所述宿主为大肠杆菌Trans10。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述表达多酚氧化酶的工程菌为含有重组表达载体的大肠杆菌Trans10，所述重组表达载体由SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3或SEQ ID NO.4所示序列分别通过Gateway克隆技术中的BP反应连接到载体pDONR207中，获得中间载体，然后将中间载体和表达载体pDEST17利用Gateway克隆技术中的LR反应连接获得重组表达载体。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述反应的条件为在0～70℃下反应；或将表达多酚氧化酶的工程菌诱导表达后与底物混合，在20℃、180rpm下诱导36h。

9.多酚氧化酶在催化如式Ⅰ结构化合物氧化生成如式III结构化合物中的应用，所述多酚氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；

所述式Ⅰ和式III的结构式如下：

式Ⅰ或式III中的R为氢或羟基。

10.一种合成黄酮的方法，其特征在于，具体方法如下：将如式Ⅰ结构化合物为底物在含有多酚氧化酶的条件下反应生成如式III结构化合物，所述多酚氧化酶的氨基酸序列如SEQID NO.8所示；

所述式Ⅰ和式III的结构式如下：

式Ⅰ或式III中的R为氢或羟基。