[发明专利]一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，具体包括以下步骤：

步骤S1：称取明胶于烧杯中，加水搅拌溶解，边搅拌边加入丙酮，室温静置，弃去上清液；再加水加温彻底溶解底部沉淀，加入HCl调节pH，再次滴加丙酮，加入用丙酮稀释的戊二醛，室温持续搅拌，挥发丙酮及戊二醛，用双蒸水稀释，使用透析袋，在双蒸水中透析后，在-4℃静置保存；

步骤S2：取步骤S1制备的明胶纳米颗粒于烧杯中，加入甘露糖，NaAc溶液溶解，调节pH，静置一段时间，再持续搅拌2天，透析袋透析24h，4℃保存；

步骤S3：获取SARS-CoV2的S蛋白的氨基酸序列，利用人工神经网络进行S蛋白针对人HLA-A2的MHC-Ⅰ分子结合力预测，筛选亲和力高的表位，并对筛选的表位进行过敏原筛选及理化性质分析，通过对多肽表位进行打分，将筛选出的多肽表位进行过敏原检测，去除可能成为过敏原的多肽表位，确定序列后合成多肽；另外设计一组MHC-Ⅱ分子限制性Th表位的长度为15个氨基酸的多肽表位；

步骤S4：调节明胶纳米颗粒溶液pH，向纳米颗粒中分别加入多肽，4℃震荡4h。

2.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，所述步骤S1中明胶取0.5g，首次加入10mL双蒸水溶解，再次加入10mL双蒸水50℃彻底溶解。

3.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S1中两次丙酮的用量分别为5～30mL，步骤S1中加入1mol/L的HCl调节pH至2.5。

4.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S1中加入用2mL丙酮稀释的0.5％的戊二醛。

5.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S1与步骤S2中使用40KD的透析袋。

6.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S2中取1mg/mL明胶纳米颗粒，0.68g甘露糖使用2mLNaAc溶解。

7.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S3中分别利用IEDB网站和NetMHC 4.0Server网站预测I类MHC分子结合位点，和对亲和力进行筛选。

8.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S3中采用SYFPEITHI方法进行打分。

9.如权利要求1所述的一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗的制备方法，其特征是，步骤S4中纳米颗粒浓度为1mg/mL，多肽浓度为10g/mL。

10.一种DC细胞靶向的纳米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗，其特征是，如所述的步骤S1-S4的制备方法制备。