[发明专利]人运动神经元存活基因1拷贝数定量检测试剂盒及分析方法

说明书

本发明公开了一种人运动神经元存活基因1拷贝数定量检测试剂盒及分析方法，所述试剂盒包括SMN1－7主反应液、SMN1－8主反应液、SMN1酶混合液、0拷贝质控品、SMN1－7单拷贝质控品、SMN1－7两拷贝标准品、SMN1－8单拷贝质控品、SMN1－8两拷贝标准品，所述SMN1－7主反应液包括用于扩增人运动神经元存活基因SMN1－7号外显子的检测引物对。本发明通过限制PCR反应体系中核心物料dNTPs使用浓度构建限制竞争性多重PCR检测体系，同时利用ARMS－PCR引物设计与“Touchdown 64－60℃”PCR扩增条件提高检测特异性，采用归一化熔解曲线分析技术实现7、8号外显子SMN1基因拷贝数的准确定量，其操作简单、检测准确性高、耗时短且检测成本低，克服了现有实时荧光定量PCR法所存在的不足。

技术领域

本发明涉及分子生物学基因检测技术领域，特别涉及一种人运动神经元存活基因1拷贝数定量检测试剂盒及分析方法。

背景技术

脊髓性肌萎缩症(spina lmuscular alrophy，SMA)是一种常见的致死性神经肌肉疾病之一，属于常染色体隐性遗传性疾病，由于脊髓前角细胞运动神经元退化变性所导致的进行性、对称性肢体近端和躯干肌肉无力瘫痪及萎缩为特征的遗传性神经肌肉疾病。该病在新生婴儿中的发病率约1/10000～1/6000，正常人群的携带率约1/50～1/40。该病的主要致病基因是运动神经元存活基因1(surviva lmotor neuron，SMN1)，位于5q11.2－13.3，该区域内结构复杂，存在的重复序列及众多假基因簇导致其结构不稳定。SMN基因在一条染色体上存在2个拷贝，分别为端粒侧SMN1和着丝粒侧SMN2，二者仅存在5个碱基的差异，分别位于第7、8号外显子和第6、7号内含子中。在SMN基因的两个拷贝中，SMN1基因的缺失是导致脊髓性肌萎缩的主要原因，约有98.6％的SMA患者中存在SMN1第7、8号外显子的纯合缺失或仅第7号外显子的杂合缺失，约95％的SMA患者表现为SMN1基因第7号外显子0拷贝，另外5％患者为SMN1杂合缺失，即属于含有微小突变的单拷贝SMN1基因，通过对SMN1基因第7号外显子拷贝数进行检测，可以实现SMA疾病的初步筛查，后续再通过其他临床医学诊断综合确定是否患有SMA疾病。因此，精准地对SMN1基因7号外显子拷贝数进行检测，对SMA患者诊断及人群携带者筛查具有重要指导意义。