[发明专利]佛司可林在T细胞培养中的应用

说明书

本发明提供了佛司可林在T细胞培养中的应用，所述的应用为向T细胞培养基中添加0‑40μM的佛司可林。佛司可林应用于T细胞的培养时，与未添加佛司可林的培养系统相比，添加佛司可林的培养系统获得的人T细胞产品中记忆性T细胞比例提高；添加佛司可林的培养系统获得的T细胞在体内、外存活时间有所延长。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及佛司可林在T细胞培养中的应用。

背景技术

近年来，肿瘤免疫领域飞速发展，正在革命性的改变肿瘤诊疗现状^[1]。其中，以CART(chimeric antigen receptor T cells，嵌合抗原受体T细胞)，TCRT(T cellreceptor modified T cells，T细胞受体嵌合型T细胞)，TIL(tumor infiltratinglymphocytes，肿瘤浸润淋巴细胞)为代表的过继免疫细胞疗法(Adoptive cell therapy，ACT)得到越来越多研究者的关注，同时也取得良好的临床应用效果^[2,3]。现有的ACT主要将T细胞为主要“武器”，通过提取患者T细胞，并经体外大量扩增后回输患者体内发挥作用(部分细胞产品涉及基因修饰等步骤，例如CART，TCRT)。T细胞产品的疗效取决于所含T细胞的数量及其生物学特性，因此深入研究影响T细胞产品生物学特性的因素极其重要。

根据分化程度的不同，可以将T细胞粗略的分为三个亚群：初始T细胞(naive Tcells，Tn)、效应性T细胞(Effector T cells，TE)和记忆性T细胞(Memory T cells，TM)。不同亚群细胞在抗肿瘤免疫中发挥的作用不尽相同，其中记忆性T细胞拥有较长的存活时间，在机体再次遇到初次致敏的抗原时，会产生二次增强性免疫应答，该亚群细胞的数量及比例在很大程度上决定了T细胞免疫的持久性^[4]。研究显示，通过体外培养条件的改良提高T细胞产品中记忆性T细胞的比例，有利于延长T细胞在体内的存活时间，进而提高抗肿瘤效果^[5,6]。因此，提高T细胞产品中记忆性T细胞比例对提高ACT疗效至关重要。

目前的对提高记忆性T细胞比例的研究主要通过改良体外培养条件进行。临床实践中最常用的提高细胞产品中记忆性T细胞含量的方法，主要是基于IL-7、IL-15、IL-21等细胞因子在记忆性T细胞形成及维持中发挥的关键作用，通过直接向培养系统中添加上述细胞因子或利用转基因的方式在T细胞中过表达上述细胞因子或(和)受体实现的^[7-9]。

中国专利201811257117.2提供了一种CD4⁺记忆性T淋巴细胞的扩增培养方法。通过在培养基中同时添加一定量的细胞因子IL-2、IL-7和IL-21，并使培养过程中培养基中灭活自体血浆、细胞因子IL-2、IL-7和IL-21保持在一定的浓度范围内，从而提升CD4⁺记忆性T淋巴细胞的扩增培养效果，提高CD4⁺记忆性T淋巴细胞的纯度及功能性。

中国专利201910376238.7提供了一种外周血记忆T细胞培养方法，所述方法包括：a)将由外周血分离得到的PBMC进行磁珠分选得到CD8⁺T细胞；将所述CD8⁺T细胞接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中含自体血浆，且细胞因子主要包括IFN-γ以及IL-2；b)换液进行扩增培养，新培养体系中含自体血浆，且细胞因子主要包括IL-2，IL-1a，IL-7，IL-15；c)将扩增好的T细胞与DC细胞共培养；其中所述DC细胞预先与自体肿瘤抗原共培养。该发明能够有效在体外扩增记忆T细胞，并有效提高活性记忆T细胞的比例。