[发明专利]非洲猪瘟多基因联合缺失减毒株的构建及作为疫苗的应用有效
| 申请号： | 202110450549.0 | 申请日： | 2021-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN113215109B | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 郑海学;李丹;党文;张克山;刘华南;申超超;冯涛;李攀;齐晓兰;张敬;刘迎琦;田宏;茹毅;杨帆;曹伟军;何继军;刘志杰;张伟;郭建宏;殷宏;孙研;刘湘涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N15/34;A61K39/187;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 戴治娟 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非洲 猪瘟 多基因 联合 缺失 减毒株 构建 作为 疫苗 应用 | ||
1.通过在基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株中联合缺失基因片段制备减毒非洲猪瘟病毒株或洲猪瘟疫苗的应用，其特征在于，所述基因片段包括ASFV G-ACD-00190基因的全部或部分核苷酸序列、ASFV MGF-110-9L基因的全部或部分核苷酸序列、ASFV G-ACD-00210基因的全部或部分核苷酸序列和ASFV MGF-505-7R基因的全部或部分核苷酸序列；所述ASFV CN/GS/2018分离株的全基因序列如SEQ ID NO.25所示；所述缺失的基因片段为ASFV CN/GS/2018分离株全长序列的第11627-12499位和第40752-42335位。
2.一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为基因片段缺失的基因Ⅱ型非洲猪病毒ASFV CN/GS/2018分离株，所述基因片段包括ASFV G-ACD-00190基因的全部或部分核苷酸序列、ASFV MGF-110-9L基因的全部或部分核苷酸序列、ASFV G-ACD-00210基因的全部或部分核苷酸序列和ASFV MGF-505-7R基因的全部或部分核苷酸序列；所述ASFV CN/GS/2018分离株的全基因序列如SEQ ID NO.25所示；所述缺失的基因片段为ASFV CN/GS/2018分离株全长序列的第11627-12499位和第40752-42335位。
3.一种非洲猪瘟减毒疫苗，其特征在于，所述非洲猪瘟减毒疫苗包括权利要求2所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株。
4. 一种制备权利要求2所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的方法，其特征在于，所述的方法是通过基因工程手段将原始基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株中第11627-12499位和第40752-42335位核苷酸序列缺失。
5.如权利要求4所述制备基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
（1）设计ASFV MGF-505-7R基因上下游序列各1.5kb作为左右同源重组臂，将所述的左右同源重组臂基因与
（2）设计ASFV MGF-110-9L基因上下游序列各1.5kb作为左右同源重组臂，将所述的左右同源重组臂与
（3）将重组质粒p53-eGFP和p20-mCherry转染至感染了ASFV原始毒株的BMDM细胞，采用噬斑克隆方法纯化筛选获得ASFV G-ACD-00190基因、ASFV MGF-110-9L基因、ASFV G-ACD-00210基因和ASFV MGF-505-7R基因联合缺失的减毒非洲猪瘟病毒Δ20/53。
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