[发明专利]一种抑制hsa_circ_0001610表达的shRNA及其表达载体

说明书

本发明公开了一种抑制hsa_circ_0001610表达的shRNA及其表达载体，属于分子生物学领域。本发明的shRNA具有如SEQ ID NO.4所示的靶点序列。本发明的表达载体包含序列如SEQ ID NO.2～3所示DNA，可靶向hsa_circ_0001610，高效地抑制其表达。

技术领域

本发明属于分子生物学领域。

背景技术

环状RNA(circular RNA，circRNA)是一类具有闭合环状结构的RNA，主要由mRNA前体经过“反向剪接”环化形成。由于circRNA不具有mRNA的5`端帽结构和3`端多聚腺苷酸结构，耐受核糖核酸外切酶的降解、稳定性较好，故具有作为肿瘤标志物的巨大潜力。研究表明，circRNA参与肿瘤的发生发展、肿瘤干性、药物抵抗等，是肿瘤治疗的新方法和新靶点。

研究报道，circRNA主要通过以下机制参与发挥生物学功能：1)作为miRNA的分子海绵，影响miRNA调节的靶基因表达；2)与蛋白相互作用，实现对蛋白功能的调控；3)编码具有功能的多肽。circRNA在肿瘤细胞周期、细胞凋亡、血管形成、侵袭等方面发挥作用。circRNAs的异常表达可能是肿瘤启动的早期关键性事件。其可作为肿瘤的分子标志物或潜在治疗靶点，为肿瘤的早期诊断、疗效评价、预后预测和肿瘤基因治疗提供新靶点。

短发夹RNA(shRNA)是一种常用的敲低(降低靶基因表达)工具，通过载体将其表达序列转入细胞内，并可进一步整合至基因组中，实现shRNA的稳定表达，并可加工成siRNA，从而持续抑制基因表达；其也可通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现靶mRNA降解。但是针对circRNA设计shRNA的难度较大，其靶点序列必须跨越环化位点，可供选择的靶点序列十分有限，往往得到的shRNA敲低效率(敲低效率＝敲低前后靶基因的表达量之差/敲低前靶基因表达量，下同)不够。Guarnerio等设计了一种敲低CircPOK的shRNA，其敲低效率约为60％(Guarnerio J，et al..Intragenic antagonistic roles of protein andcircRNA in tumorigenesis.Cell Res.2019 Aug；29(8)：628-640.)；Chen等设计了一种敲低circRNA_0000285的shRNA，其敲低效率在50％～60％之间(Chen RX，et al.CircularRNA circRNA_0000285 promotes cervical cancer development by regulatingFUS.Eur Rev Med Pharmacol Sci.2019 Oct；23(20)：8771-8778.)。

hsa_circ_0001610是一种由TNFRSF21基因表达的circRNA，其被发现在子宫内膜癌组织中高表达，是子宫内膜癌潜在的治疗靶点。目前尚未见有关使用shRNA敲低hsa_circ_0001610的报道。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种抑制环状RNA hsa_circ_0001610表达的shRNA及其表达载体。

本发明的技术方案如下：

一种抑制hsa_circ_0001610表达的shRNA，其靶点序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明中“靶点序列”指靶基因与shRNA的基因所共有的序列；因为存在该“靶点序列”，shRNA或其加工得到的siRNA产物得以特异性识别靶基因的mRNA。

进一步地，表达该shRNA的DNA的正义链序列如SEQ ID NO.2所示。

一种双链寡核苷酸，其正义链序列如SEQ ID NO.2所示，反义链序列如SEQ IDNO.3所示。

一种抑制hsa_circ_0001610表达的shRNA的表达载体，所述载体包括表达前述的shRNA的DNA序列。