[发明专利]一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用

权利要求书

1.一种防治糖尿病足的干细胞组合物，其干细胞的成分配比如下：造血干细胞50％、胚胎干细胞15％、肌肉干细胞30％和神经干细胞5％，其中，造血干细胞的成分包含红细胞60％、白细胞10％和血小板30％。

2.根据权利要求1所述的一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：选择合适的糖尿病足的志愿者；

步骤二：对入选的糖尿病足患者进行术前检查；

步骤三：给检查后的志愿患者皮下注射G-CSF150ug/d，每日注射两次，同时给予输注0.9％生理盐水250m1+肝素4000IU静滴，维持6h缓慢滴注，或低分子右旋糖酐500ml静滴，连用2～5d，并嘱咐患者多饮水，每2d检查外周血白细胞计数1次，使外周血白细胞计数控制在3～4×10¹⁰/L，监测白细胞变化，当白细胞升至平均20～250g/L时，采用血细胞分离机采集单个核细胞(MNC)进行外周干细胞采集；

步骤四：采集时，患者仰卧位平躺在病床上，选择患者手臂一侧的静脉进行采血，另一侧的静脉进行回输，且患者在进行采集的过程中尽量保持心情的舒畅；

步骤五：采集完成后将穿刺针拔除，对患者的手臂处进行局部按压，并覆盖无菌治疗贴，防止患者穿刺部位发生感染，同时将采集的细胞悬液和血浆送入实验室；

步骤六：在实验室中对采集的自体外周血间充质干细胞进行分离和培养，使用生理盐水将细胞调整至适当量，随后对患者进行于糖尿病下肢血管介入术后病变动脉内注射预防再狭窄，增加微循环；

步骤七：经过一段时间的修养后对患者的小腿疼痛、足部疼痛、保肢率、冷、凉感觉等情况进行记录。

3.根据权利要求2所述的一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用，其特征在于：所述步骤一中，选择志愿患者的标准为：

①有间歇跛行且静态状态下踝肱指数(ABI)的范围在0.6-0.8之间的，或已有静息痛、溃疡或坏疽的志愿者；

②保守治疗无效，经介入手术及搭桥无法解决开道血流的患者；

③尽管有较好的流出道动脉，但患者年龄较大，不能忍受手术治疗的志愿患者；

④无主要器官功能障碍，无精神病史以及语言功能障碍的志愿患者；

⑤志愿患者需同意填写知情同意书。

4.根据权利要求2所述的一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用，其特征在于：所述步骤二中，术前检查的项目包括：血生化(含凝血酶原时间)、病毒检查、血常规、尿常规、肿瘤标志物、心肺功能检查、皮肤颜色与温度、足背动脉搏动、踝部血压测定、四肢关节运动、姿势、步态、以及疼痛情况、溃疡坏疽部位、性质与程度、创面芽生长情况及分泌物情况、肢体X射线照片、病变血管动脉造影。

5.根据权利要求2所述的一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用，其特征在于：所述步骤三中，对患者的外周干细胞采集当天患者清淡饮食，并服用葡萄糖酸钙20ml，并对患者的性别、身高、体重等进行记录。

6.根据权利要求2所述的一种防治糖尿病足的干细胞组合物及其应用，其特征在于：所述步骤四中，用血细胞分离机采集自体外周血干细胞，采集时的血流速度为50-60mL/min，每次分离时间约3-4h，分离血液的总容积8-10L，一次采够，获得单个核细胞的细胞悬液100-150mL(细胞数量平均5×108/ml)。