[发明专利]一种高抗氧化活性灰树花多糖的制备及提纯方法

权利要求书

1.一种具有体外高抗氧化活性的灰树花(Grifola frondosa)多糖的制备和提纯方法，其特征在于：所述方法是在灰树花液体发酵初始时或发酵过程中加入法尼醇；

所述法尼醇的终浓度为0.2～1.0mmol/L。

2.根据权利要求1所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：所述灰树花为保藏编号为CGMCC No.5.404的灰树花孔菌，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院生物研究所。

3.根据权利要求1所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：所述方法是在第0-2d添加法尼醇。

4.根据权利要求1所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：所述方法是将灰树花接种至发酵培养基中，向发酵培养基中添加法尼醇。

5.根据权利要求4所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：所述液体发酵培养基每L含有：葡萄糖22g，蛋白胨3g，磷酸二氢钾1.2g，七水硫酸镁0.8g，维生素B₁0.12g，自然pH。

6.根据权利要求1所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：具体步骤为：

(1)将灰树花种子液接种至发酵培养基中，在灰树花发酵初始时或发酵过程向发酵培养基中加入法尼醇，于25～28℃，160r/min发酵8d；

(2)取分离灰树花菌丝体后的发酵液按发酵液：95％乙醇的体积比为1：4与95％乙醇混合，4℃醇沉过夜，离心后弃上清，沉淀加蒸馏水溶解，在60℃以下溶解8h，即得发酵液多糖溶液；

(3)将得到的发酵液多糖溶液冷冻干燥后，进行脱蛋白脱色后，冷冻干燥；配制5mg/mL的多糖溶液经DEAE-650M离子交换柱层析纯化，依次用蒸馏水、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L、1.0mol/L的NaCl溶液洗脱，收集相应的组分；将相应组分多糖溶液经葡聚糖凝胶柱纯化得到相应组分，即得具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖。

7.根据权利要求6所述的具有体外高抗氧化活性的灰树花多糖的制备和提纯方法，其特征在于：按体积比为10％的接种量进行接种。