[发明专利]一种基于LFD-RMA法检测幽门螺杆菌的引物探针组

说明书

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD‑RMA法检测幽门螺杆菌的引物探针组，包括检测幽门螺杆菌的引物对及对应的探针，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第31个碱基T替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3‑spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。本发明的检测方法简单、无创、快速，准确度高，安全性好，可广泛应用于幽门螺杆菌的快速检测。

技术领域

本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于LFD-RMA法检测幽门螺杆菌的引物探针组。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是一种革兰氏阴性杆菌，其生存能力极强，能够在胃中强酸性环境中生存，是目前发现的唯一能够在胃里面生存的细菌，人是它的唯一宿主和传染源。HP是消化性溃疡发生和治疗后复发的主要原因，它在十二指肠溃疡患者中检出率高达95％-100％，胃溃疡患者中的检出率在70％以上。同时，HP可以引起胃癌和胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生，被世界卫生组织明确列为Ⅰ类致癌物。HP在全世界各地的感染率各异，主要取决于人种差异、居住环境、卫生条件、经济状况、受教育程度、高危职业(医护人员)等因素，但总体感染人数庞大。我国成人感染率统计数字不一，但普遍认为在50％以上。大部分感染者是无症状的，只有在体检时做相关检查才能发现；少部分人会表现为消化不良的症状；10％-20％的感染者会发生消化性溃疡；更少一些人会发生胃癌或胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤。因此快速准确地检测HP感染对大众健康具有重要意义。

目前幽门螺杆菌的检查主要有血清Hp抗体检测、尿素呼气实验、粪便幽门螺杆菌抗原检测和荧光定量PCR检测。其中血清抗体检验由于无法区分是既往感染还是正在感染，一般用于人群感染率的流行病学调查；粪便Hp抗原检测的普及度还不是很高；尿素呼气实验目前广泛用于临床上判断感染和治疗后的复查，但要检查前4周内停用或禁用抗生素、铋剂和抑酸药物，且易出现假阳性；荧光定量PCR方法灵敏高效，但费用高昂，不适合在基层医院推广普及。

而重组酶介导扩增(Recombinase Mediated Amplification,RMA)技术，是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的等温核酸扩增技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37-42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平，可实现核酸的快速扩增。RMA技术可以与侧流免疫层析技术(LFD)相结合进行扩增产物的检测，既不要求特殊仪器设备，也无需复杂的样品处理，仅使用侧流层析试纸就可以通过肉眼观察结果，因此可实现幽门螺杆菌的快速检测。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于LFD-RMA法检测幽门螺杆菌的引物探针组，本申请是通过下述方案实现的：

一种基于LFD-RMA法检测幽门螺杆菌的引物探针组，包括检测幽门螺杆菌的引物对及对应的探针，其中，引物和探针序列为：

HP-F：

5’-GGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGATGAA-3’；

HP-R：

5’-[Biotin]ATTGAGCAATATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTA-3’；

HP-P：

5’-[FAM]AGGCTATGACGGGTATCCGGCCTGAGAGGG[dSpacer]GAACGGACACACTGGA[C3-spacer]-3’。

优选的，所述下游引物的5’端用Biotin标记；探针的5’端用FAM标记，第31个碱基T替换为THF(dSpacer)，3’末端被阻断基团C3-spacer修饰；扩增产物大小不超过500bp。