[发明专利]一种聚集诱导发光肽组装体、制备、检测方法及其应用

权利要求书

1.一种聚集诱导发光肽组装体，其特征在于，包括黑磷纳米片和聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽，所述黑磷纳米片表面包覆聚多巴胺，在溶液状态下，所述聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽通过π-π共轭的静电相互作用堆叠于所述黑磷纳米片表面，所述π-π共轭的静电相互作用是由聚集诱导荧光分子与聚多巴胺之间形成的。

2.根据权利要求1所述的一种聚集诱导发光肽组装体，其特征在于，所述聚集诱导荧光分子为四苯乙烯衍生物。

3.一种聚集诱导发光肽组装体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1制备聚多巴胺包覆的黑磷纳米片，具体步骤为：

A1将块状黑磷充分分散于无水1-甲基-2-吡咯烷酮中，于15～25℃中进行超声破碎6～9h后以2000～4000rpm的转速离心20～30min，收集棕色上清液；

A2将步骤A1制得的棕色上清液以9000～12000rpm的转速离心15～30min离心得片状黑磷沉淀，冷冻干燥所述片状黑磷沉淀后将其进行超声分散0.5～1h以均匀分散于无水乙醇中，加入盐酸多巴胺水溶液和氢氧化钠水溶液，避光搅拌2～5h后，进行离心并用纯水多次洗涤，冷冻干燥得聚多巴胺包覆的黑磷纳米片；

S2聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽制备：取四苯乙烯衍生物溶解于PBS磷酸盐缓冲溶液中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌3～5h加入细菌内毒素靶向肽反应10～15h，避光透析后冷冻干燥得四苯乙烯修饰的细菌内毒素靶向肽；

S3肽组装体制备：将步骤S2制得的四苯乙烯修饰的细菌内毒素靶向肽溶解于PBS磷酸盐缓冲溶液，加入步骤S1制得的聚多巴胺包覆的黑磷纳米片，搅拌0.25～1h得处于溶液状态下的聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽组装于聚多巴胺包覆的黑磷纳米片的肽组装体。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤A1中，所述块状黑磷分散于无水1-甲基-2-吡咯烷酮溶液的质量分数为0.25～0.5mg/ml。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤A2中，冷冻干燥的片状黑磷沉淀与加入的所述盐酸多巴胺的质量比为1:1～2，所述盐酸多巴胺水溶液与所述氢氧化钠水溶液的浓度比为1:1～2。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述四苯乙烯衍生物、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和细菌内毒素靶向肽的摩尔比为1:1～4:1～4:1～4。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，透析截留的分子量为1000～2000Da。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述步骤S2制得的四苯乙烯修饰的细菌内毒素靶向肽溶解于PBS磷酸盐缓冲溶液的浓度为1～5μM，所述四苯乙烯修饰的细菌内毒素靶向肽浓度与加入的所述聚多巴胺包覆的黑磷纳米片质量之比为1μM:25～50μg。

9.一种非诊断和治疗目的的细菌内毒素的检测方法，其特征在于，利用所述权利要求1或2所述的聚集诱导发光肽组装体或权利要求3至8任一项所述的方法制备的聚集诱导发光肽组装体作为荧光传感器，检测细菌内毒素，具体包括以下步骤：

L1所述聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽堆叠于所述黑磷纳米片表面产生荧光信号，荧光传感器处于开启状态；

L2所述聚集诱导发光肽组装体与检测样品混合，聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽挣脱静电相互作用与检测样品内的细菌内毒素竞争性结合；

L3聚集诱导荧光分子修饰的细菌内毒素靶向肽与检测样品内的细菌内毒素结合，不断脱离黑磷纳米片表面，荧光信号逐渐减弱，荧光传感器处于关闭状态。

10.权利要求1或2所述的聚集诱导发光肽组装体或权利要求3至8任一项所述的方法在制备细菌内毒素和革兰氏阴性菌活菌检测产品中的应用。