[发明专利]脊髓损伤修复材料及组织工程支架的制备方法

权利要求书

1.一种脊髓损伤修复材料，其特征在于：按照重量份数计，包括以下组分：高分子材料聚己内酯10～40份、脊髓生物材料5～20份、水凝胶10～20份、药物0～5份；

所述高分子材料聚己内酯用于：制备高分子材料溶液，混合均匀得到微米纤维成型墨水，所述微米纤维成型墨水被转移至3D打印设备中采用静电纺丝技术打印出方向相同的微米纤维；

所述脊髓生物材料为脱细胞脊髓；

所述水凝胶是经紫外光UV照射制成的水凝胶；

所述药物用于制备载药微米纤维/脱细胞脊髓水凝胶复合支架：将所述脱细胞脊髓溶解于蒸馏水中形成脊髓脱细胞支架溶液；向所述脊髓脱细胞支架溶液中按比例加入所述水凝胶和所述药物，形成载药脊髓脱细胞支架水凝胶；将所述载药脊髓脱细胞支架水凝胶填充到所述方向相同的微米纤维上，随后将打印方向相同的微米纤维制成似脊髓圆柱形，置入密闭空间内紫外线照射固化，得到所述载药微米纤维/脱细胞脊髓水凝胶复合支架。

2.根据权利要求1所述的脊髓损伤修复材料，其特征在于：所述药物为可促进神经干细胞分化、轴突再生药物WAY316606。

3.根据权利要求1所述的脊髓损伤修复材料，其特征在于：所述水凝胶包括水、甲基丙烯酰化明胶GelMA、双键-β-环糊精、聚乙二醇二丙烯酸酯PEGDA和光引发剂LAP，其中水：甲基丙烯酰化明胶GelMA：双键-β-环糊精：聚乙二醇二丙烯酸酯PEGDA：光引发剂LAP的配比为100份：12份：8份：1份：0.1份，经300～400nm紫外光UV照射5～15分钟制成水凝胶。

4.一种脊髓损伤修复组织工程支架的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备定向的微米纤维：将聚己内酯制成聚己内酯溶液，混合均匀得到微米纤维成型墨水，将所述微米纤维成型墨水转移至3D打印设备中采用静电纺丝技术打印出方向相同的微米纤维；

S2、制备脱细胞脊髓支架：将取到的脊髓经冰融、化学萃取法脱去脊髓细胞，保留脊髓细胞外基质的天然成分得到脊髓生物材料，即脊髓脱细胞支架，将脊髓生物材料在冰冻干燥机内干燥24～48小时，取出后置入-20～-80℃的冰箱中冰冻保存；

S3、制备水凝胶：将水、甲基丙烯酰化明胶GelMA、双键-β-环糊精、聚乙二醇二丙烯酸酯PEGDA和光引发剂LAP，经紫外光UV照射制成水凝胶；

S4、制备载药脱细胞脊髓水凝胶：将所述脊髓脱细胞支架剪碎，按比例加入蒸馏水，充分振荡，使所述脊髓脱细胞支架溶解于蒸馏水中形成乳白色的脊髓脱细胞支架溶液；向所述脊髓脱细胞支架溶液中按比例加入水凝胶和药物WAY316606，充分振荡混匀，形成载药脊髓脱细胞支架水凝胶；

S5、制备载药微米纤维/脱细胞脊髓水凝胶复合支架：将所述载药脊髓脱细胞支架水凝胶填充到 3D 打印方向相同的微米纤维上，随后将打印方向相同的微米纤维制成似脊髓圆柱形，置入密闭空间内紫外线照射固化，得到载药微米纤维/脱细胞脊髓水凝胶复合支架，固化后的所述复合支架经消毒后备用，即得脊髓损伤修复组织工程支架。

5.根据权利要求4所述的脊髓损伤修复组织工程支架的制备方法，其特征在于，步骤S2制备脱细胞脊髓支架的具体操作步骤如下：

①将动物的脊髓在-75～-85℃的冰箱冷冻1小时，然后室温解冻：

②浸入蒸馏水中浸泡6h，每2小时换液一次,所述换液液体为蒸馏水：

③将脊髓放入wt1％的TritonX-100磷酸缓冲液中，以25℃、100r/min的条件连续振荡萃取3h；

④蒸馏水振荡漂洗3h，每小时换液一次,所述换液液体为蒸馏水；

⑤wt1％的脱氧胆酸钠缓冲液中室温下连续振荡萃取3h；

⑥蒸馏水振荡漂洗3h，每小时换液一次,所述换液液体为蒸馏水；

⑦将脊髓放入wt1％的TritonX-100磷酸缓冲液中，以25℃、100r/min的条件连续振荡萃取3h；

⑧蒸馏水振荡漂洗3h，每小时换液一次,所述换液液体为蒸馏水；

⑨将步骤⑧得到的产物置于冷冻干燥机内冷冻干燥24～48h，制得脱细胞脊髓。

6.根据权利要求4所述的脊髓损伤修复组织工程支架的制备方法，其特征在于：所述脊髓损伤修复组织工程支架成品的孔隙率为40～95%，一级孔径为100～2000μm，次级孔孔径为1～100μm。