[发明专利]用于对虾饲料的芽孢杆菌及对虾饲料用发酵型中草药制剂

权利要求书

1.用于对虾饲料的芽孢杆菌，其特征在于包括沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）和同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）；

所述沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）保藏编号：CGMCC NO. 22059，保藏日期：2021年3月23日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

所述的同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）保藏编号：CGMCC NO. 22060，保藏日期：2021年3月23日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.一种对虾饲料用发酵型中草药制剂，其特征在于该制剂是通过以下步骤制备得到：

（1）中草药的预处理：先将熟地、当归、白芍、川芎四种中草药置于烘箱中烘干24小时后，分别置于高速刀式多级粉碎机中粉碎，过60~100目筛后，使用电子天平精确称取上述中草药，按比例混合后，装袋密封备用；所述的按比例混合是熟地、当归、白芍和川芎按质量份12-20份：9-25份：9-12份：6-10份的比例混合；

（2）复苏菌种：将置于-80℃超低温冰箱中的权利要求1所述的沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）和同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）按1%~5%的体积比分别接种量接种于2216E液体基中培养，在24~28℃，160~220rpm条件下，培养20~28h；使用平板菌落计数法计算活菌数目，当菌种复苏培养基中的活菌数达3.2×10⁸~5.2×10⁸cfu/ml时，停止活菌的培养；

（3）中草药液体发酵培养基的配制：首先，取一定量步骤1得到的按比例混合的中草药，加入中草药质量4~6倍的纯水, 得到中草药溶液，分别向溶液中添加溶液质量分数4~6%的NaCl，3~5%的 MgSO₄·7H₂O，0.22~0.63%的KH₂PO₄，2~4%的木薯粉，置入蒸汽灭菌锅中，121℃，灭菌35分钟，放置在超净工作台里冷却；然后再往冷却后的中草药溶液中添加其质量分数为0.12~0.34%的L-谷氨酸，0.2~1.2%的VC，调节PH为6.8~7.4，配置好的溶液即中草药液体发酵培养基，将其在无菌条件下存放备用；

（4）中草药发酵液的制备：将步骤2的沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）和同温层芽孢杆菌（Bacillus stratosphericus）按照体积比为1:1~1:4的比例混合成为复合芽孢杆菌，以3%~11%接种于步骤3的中草药液体发酵培养基中，160~210rpm，26~32℃，培养28~36h，即得中草药发酵液；

（5）有效成分提取：向获得的中草药发酵液里加入6~10倍质量的纯水，45℃低温浸提2.2~2.8h，低温浸提三次，合并这三次滤液；然后再往浸提后的药渣中加入2倍质量的纯水，浸提两次；合并5次滤液；

（6）发酵中草药制剂的制备：将步骤5得到的滤液于45~55℃旋转蒸发，浓缩至粘稠状后，冷冻干燥24~32h即得发酵中草药制剂。

3.一种基于发酵中草药制剂的对虾饲料，其特征在于该对虾饲料是在基础饲料中添加权利要求2所述的中草药制剂，且每千克基础饲料中添加的发酵中草药制剂以质量分数计为0.2%—0.8%。

4.如权利要求3所述的对虾饲料，其特征在于每千克基础饲料中添加的发酵中草药制剂以质量分数计为0.2%、0.5%或0.8%。

5.如权利要求3或4所述的对虾饲料，其特征在于所述的基础饲料包括以下成分：以质量分数计鱼粉34%、豆粕20%、花生粕16.4%、小麦粉22%、大豆磷脂5%、复合维生素0.6%、复合矿物质2%。