[发明专利]一种检测病毒的试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测病毒的试剂盒。本发明通过针对寨卡病毒NS1序列进行分析获得了特异性针对NS1检测的RPA引物和探针，并制备成为相应的检测试纸条；同时针对NS1蛋白筛选并获得效果较好的单克隆抗体，将所述单克隆抗体标记量子点和其他抗体标记的硝酸纤维素膜制备获得寨卡病毒荧光量子点快速检测试纸，将两个检测方法进行组合使用，能够进一步提高检测的准确性，并且成本低廉，适于大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及病毒诊断领域,并且更具体地涉及一种检测病毒的试剂盒。

背景技术

寨卡病毒(Zika virus)是近年兴起一种的与登革热、日本脑炎、西尼罗河热病毒等高度相似的虫媒黄病毒。该病毒是一种单链的RNA病毒，基因组全长11kb，编码3个结构蛋白(C、prM/M和E)，及7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。ZIKV在全球的大规模爆发，导致包括成人格林-巴利综合征和新生胎儿的先天性畸形等严重疾病。

目前检测ZIKV的主要检测方法有病原学检测、血清学检测。其中病原学检测主要为核酸检测(RT-qPCR，LAMP)，血清学检测包括：血清特异性IgM抗体(ELISA、IFA)和中和抗体。病原学检测精准性高、检测时间短，但是设备昂贵，易出现假阳性。此外，由于病毒出现的窗口期短，基于核酸的检测方法很难准确检出。血清学检测简便、快速，但是IgM/IgG通常在发病后7天后才能检出，且受不同感染患者的症状发作影响。

非结构蛋白1(Nonstructural protein 1)作为病毒唯一分泌并与宿主相互作用的重要蛋白，在病毒感染、复制及免疫逃逸过程中起着重要作用。NS1蛋白在细胞内形成同源二聚体，与胞内膜系统的脂类结合，参与病毒复制，并以可溶性的形式分泌于细胞外。此外，NS1蛋白作为抗原，可诱导机体产生抗体，是病毒早期诊断的重要标志物。因此，开发基于ZIKV-NS1的检测试剂盒，对ZIKV的临床诊断和治疗具有重要实际应用价值。但NS1核酸检测精准性高但病毒出现的窗口期短，易出现假阳性；而NS1在病毒血症阶段可同时检测到，并且在病毒血症阶段后仍可检测到，提供比病毒RNA更长，但黄病毒间交叉反应常见，寨卡病毒易与登革病毒、黄热病毒、圣路易斯脑炎病毒等存在血清学交叉反应，难以鉴别。

发明内容

基于上述发现，本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种制备简单、成本低廉、使用方便、不需要高精尖仪器的检测试剂盒。所述试剂盒通过核酸-抗体双重检测方法对寨卡病毒进行检测，进一步提高检测的准确性。

本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种用于快速检测寨卡病毒的试纸条RPA(LFD RPA)检测试剂盒，含有侧流层析试纸条(Hybridetect 2T，Milenia Biotec GmbH,Germany)，以及有一对引物和一条探针，其中所述上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物序列如SEQ ID NO:3所示，所述探针的序列如SEQ ID NO：4所示。

具体的，上游引物(SEQ ID NO：2)：

GAGCTCAATGCAATCCTGGAAGAGAATGGAG

下游引物(SEQ ID NO：3)：

Biotin-GTCACCATCCACGACAAAGCTGTTATTTGTC

探针序列(SEQ ID NO：4)：

FAM-CATGTGGAGAGGTCCACAGAGATTGCCCGTGCCTGTGAACGAGCTGC,

在一些实施例中，本发明的探针在中间距5’端35bp的位置处采用dSpacer修饰，dSpacer分子两侧的距5’端34bp和36bp位置的胸腺嘧啶(dT)分别被荧光基团FAM和淬灭基团BHQ1取代，并且在探针的3’末端通过阻塞基团C3Spacer修饰。