[发明专利]一种不飞絮柳属植物的繁育方法

权利要求书

1.一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）、柳树种子的灭菌及萌动处理；

步骤（2）、在25℃下用诱变秋水仙碱培养基处理萌动的柳树种子，获得染色体加倍的柳树苗；

步骤（3）、将步骤（2）得到的染色体加倍的柳树苗转移到改良MS培养基上紫外线诱变驯化培养，直到幼苗逐渐生根完成后进行移栽，移栽后培养5-6年得到进入生殖成熟期的柳树；

步骤（4）、 将步骤（3）得到的进入生殖成熟期的柳树与普通二倍体柳树杂交，获得三倍体柳树苗，即不飞絮柳属植物；

所述步骤（2）具体包括以下步骤：将步骤（1）处理好的柳树种子在无菌操作台中，转移到装有诱变秋水仙碱培养基的三角瓶中摇床震荡培养处理48小时后，用锡箔纸将三角瓶瓶身完全遮盖后，将溶液去除，将柳树种子取出用无菌水反复冲洗6-7次，并在筛选培养基中进行光照培养12-15天，直到柳树幼苗表现为子叶膨大，且略出现绿色；期间淘汰出现的弱苗和快速伸长的徒长柳苗；

所述诱变秋水仙碱培养基的组成如下：秋水仙碱素0.6g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L；所述筛选培养基的组成如下：KCl 为1g，琼脂10g，秋水仙素5g，余量为水，pH调为6，以上体积总量为1L；

所述步骤（3）中改良MS培养基配制的时候，母液Ⅰ中KH₂PO₄ 的浓度为3500mg/L，母液Ⅱ中KI的浓度为176mg/L，母液Ⅳ中甘氨酸的浓度为600mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤（1）柳树种子的灭菌及萌动处理具体包括以下步骤：

步骤1.1、在超净工作台中将其柳树种子置于无菌三角瓶中；首先加入体积浓度为75％的酒精，进行快速润洗，随后迅速将酒精倒出，并立即用无菌水冲洗6次；再将柳树种子浸泡于过氧化氢中，浸泡期间摇床震荡20分钟后用体积浓度为75％的酒精消毒；最后，用无菌水反复冲洗柳树种子5-6次；

步骤1.2、将上述处理后的柳树种子加入细胞分裂素的无菌水溶液中， 用透气的封口膜封口后，置于恒温培养箱内避光培养，然后用无菌水清洗种子3次以上；随后，用恒温震荡器震荡1小时后加入无菌水，继续在恒温培养箱内避光培养，直至种子子叶萌发。

3.根据权利要求2所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤1.1中酒精的用量与柳树种子的用量比例为8-20ml/100粒，酒精的润洗时间不超过40秒；过氧化氢的体积浓度为10％，过氧化氢的用量与柳树种子的用量比例为20-30ml/100粒，过氧化氢的浸泡时间为20-25分钟。

4.根据权利要求2所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述步骤1.2中的细胞分裂素的质量浓度为0.6％，细胞分裂素的用量与步骤1.1处理后的柳树种子的用量的比例为8-20ml/100粒，添加细胞分裂素的培养时间为10-15小时，添加细胞分裂素的培养温度20-26℃；无菌水的用量为8-20ml/100粒柳树种子，无菌水的培养温度为20-26℃，添加无菌水的培养时间为20-26小时。

5.根据权利要求1所述的一种不飞絮柳属植物的繁育方法，其特征在于：所述柳树种子选自旱柳、垂柳或者钻天柳。