[发明专利]一种甘蔗脱毒苗生产方法

权利要求书

1.一种甘蔗脱毒苗生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.将甘蔗茎砍成带单芽的蔗种，用水浸泡10-16h，冲洗干净后捞起晾干；

b.在蔗芽的表面上放置3-5层滤纸或草纸完全遮盖住蔗芽，将防漏胶贴贴在遮盖住蔗芽的滤纸或草纸及周边的蔗茎上，压紧边沿，放置的滤纸或草纸面积为0.5-0.8×0.8-1.5cm，贴的防漏胶贴面积为2.0-2.5×2.5-3.0cm，面积大于滤纸或草纸，且防漏胶贴每个边超出滤纸或草纸0.5-0.7cm宽；

c.将贴好防漏胶贴的蔗种于52℃水浴30min，期间每隔3-5min翻动一下，然后取出蔗种；去除蔗芽外的防漏胶贴及滤纸或草纸后，将蔗芽置于波尔多液中浸泡10-20s后取出，晾干；

d.将晾干的蔗种的蔗茎轴向横置、芽点向上稳定放置于铺好的2-3层草纸或旧报纸上，光照培养，光照培养条件为：光照5000-8000LX，温度35℃-38℃，相对湿度60％-80％；

e.当蔗芽长高至10-15cm时，取出蔗种，于无菌条件下，喷撒体积分数75％的乙醇水溶液后，用干净滤纸或草纸把种茎包3-5层并露出蔗芽及其基部，分离出生长点作为外植体，分离的生长点，其呈圆锥型，基部3-4mm，顶部直径1-2mm，长5-10mm；

f.将生长点接种至芽诱导培养基培养，培养条件为：光照2000-5000LX，温度27±2℃，相对湿度60％-80％，利用支撑部件，使生长点基部浸没在培养基中、生长点其余部分露出培养基液面；每5-7天更换一次新的芽诱导培养基，直至形成丛芽；所述的芽诱导培养基，每升含有：6-BA 0.5-3.0mg、KT 0.5-1.5mg、TDZ 0.1-1.0mg和蔗糖30-40g，余量为MS培养基；

g.将丛芽接种在繁殖培养基中培养，培养条件为：光照2000-5000LX，温度27±2℃，相对湿度60％-80％，每15-20天继代1次；所述的繁殖培养基，每升含有：6-BA0.5-3.0mg、NAA0.01-1.0mg和蔗糖30-40g，余量为MS培养基；

h.继代5-8次后，将丛芽转入促根培养基培养，培养条件为：光照2000-5000LX，温度27±2℃，相对湿度60％-80％，当根长2-3cm时，炼苗，然后移栽；所述的促根培养基，每升含有：NAA 0.5-2.5mg、IBA 0.5-3.0mg和蔗糖40-80mg，余量为MS培养基。

2.根据权利要求1所述的甘蔗脱毒苗生产方法，其特征在于，所述的甘蔗为黑皮果蔗、黄皮果蔗、粤糖93-159或新台糖22品种。

3.根据权利要求1所述的甘蔗脱毒苗生产方法，其特征在于，所述的步骤f的支撑部件是通过如下方式构建的：将滤纸折叠成两边高中间低，稳定放置在培养瓶中，加入灭菌的芽诱导培养基至在培养瓶中形成一定深度液层，将生长点接种在滤纸上的较低点，使生长点基部浸没在培养基中、生长点其余部分露出培养基液面。