[发明专利]刺激-响应聚合物基质D-氨基酸氧化酶反应器的制备及其酶解效率调控方法

权利要求书

1.一种双刺激响应聚合物P(St-MAn-NIPAm-SP)，其结构式如式1所示：

式1中，z、i、m、n均表示聚合度，独立地选自1-15的整数。

2.制备权利要求1中式1所示双刺激响应聚合物P(St-MAn-NIPAm-SP)的方法，包括如下步骤：

(1)合成链转移剂P(St-MAn)：

将马来酸酐(MAn)、苯乙烯(St)、S-苄基二硫苯甲酸酯(BBDT)在偶氮二异丁腈(AIBN)存在下在溶剂1,4-二氧六环中反应，得到链转移剂P(St-MAn)；

(2)使得链转移剂P(St-MAn)与N-异丙基丙烯酰胺在AIBN存在下在溶剂中反应合成P(St-MAn-NIPAm)；

(3)使得P(St-MAn-NIPAm)与丙烯酸-N-羟乙基-3,3-二甲基-δ-硝基吲哚啉螺吡喃酯(SP)在AIBN存在下在溶剂中反应合成P(St-MAn-NIPAm-SP)。

3.权利要求1中式1所示双刺激响应聚合物P(St-MAn-NIPAm-SP)作为酶固定化载体的应用，所述酶为D-氨基酸氧化酶。

4.一种D-氨基酸氧化酶反应器，即，刺激-响应聚合物基质D-氨基酸氧化酶反应器，基于权利要求1中式1双刺激响应聚合物P(St-MAn-NIPAm-SP)制备得到。

5.制备权利要求4所述的D-氨基酸氧化酶反应器的方法，包括：1)制备Fe₃O₄@(St-MAn-NIPAm-SP)多孔膜：

2)将Fe₃O₄@(St-MAn-NIPAm-SP)多孔膜、D-氨基酸氧化酶与催化剂LiClO₄在缓冲液中反应，得到固定有D-氨基酸氧化酶的双刺激响应聚合物基质酶反应器，即刺激-响应聚合物基质D-氨基酸氧化酶反应器。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤1)的操作为：将P(St-MAn-NIPAm-SP)和Fe₃O₄磁性纳米颗粒悬浮于THF中，超声使其分散均匀，滴加于玻璃面板上，待THF完全挥发干后形成Fe₃O₄@(St-MAn-NIPAm-SP)多孔膜；

其中，P(St-MAn-NIPAm-SP)与Fe₃O₄磁性纳米颗粒的质量比为3:1。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述Fe₃O₄@(St-MAn-NIPAm-SP)多孔膜、D-氨基酸氧化酶与催化剂LiClO₄的质量比依次为20:5:2，其中D-氨基酸氧化酶的酶活为7.2U/mg；

所述缓冲液为浓度为100.0mM，pH值为8.2的磷酸缓冲液；

所述反应在冰浴中进行，所述反应的时间为3.0～5.0h。

8.权利要求4所述的D-氨基酸氧化酶反应器即刺激-响应聚合物基质D-氨基酸氧化酶反应器在调控D-氨基酸氧化酶酶解效率中的应用。

9.一种调控D-氨基酸氧化酶酶解效率的方法，为：构建权利要求4所述的刺激-响应聚合物基质D-氨基酸氧化酶反应器，调节温度和/或光照来调控D-氨基酸氧化酶酶解效率。