[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶变体及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202110464798.5 | 申请日： | 2021-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN113234697B | 公开（公告）日： | 2022-09-02 |
| 发明（设计）人： | 杨愈丰;郭坚;刘迪嘉;许佳伟 | 申请（专利权）人： | 遵义医科大学珠海校区 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/10;C12N15/81;C12Q1/32;C12Q1/54;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 尹凡华 |
| 地址： | 519041 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 葡萄糖 脱氢酶 变体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种葡萄糖脱氢酶变体，其特征在于，如SEQ ID NO:1所示的来源于土曲霉的葡萄糖脱氢酶中第336位氨基酸置换成其他氨基酸，所述其他氨基酸选自组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸或谷氨酰胺。
2.根据权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶变体，其特征在于，所述第336位氨基酸置换成甲硫氨酸或谷氨酰胺。
3.根据权利要求2所述的葡萄糖脱氢酶变体，其特征在于，所述第336位氨基酸置换成甲硫氨酸。
4.一种用于葡萄糖测定的组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶变体。
5.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶变体。
6.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求5所述的核苷酸分子。
7.一种转化体，其特征在于，所述转化体使用权利要求5所述的核苷酸分子或权利要求6所述的重组载体。
8.权利要求1-3中任一项所述的葡萄糖脱氢酶变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）通过如SEQ ID NO:2-3所示的引物对野生型FAD-GDH基因进行扩增，并与载体pPICK9连接，得到重组质粒pPICK9-
（2）以所述重组质粒pPICK9-
（3）将所述突变质粒进行线性化处理，并转化至宿主细胞中；
（4）将步骤（3）经转化后的宿主细胞，分离纯化，得到所述葡萄糖脱氢酶变体。
9.权利要求1-3中任一项所述的葡萄糖脱氢酶变体在制备血糖试纸或葡萄糖传感器中的应用。
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