[发明专利]酸水解化合物的合成方法及其用于固相耦合糖蛋白、固相改性衍生和富集糖肽的方法

说明书

本发明公开了一种酸水解化合物的合成方法及其用于固相耦合糖蛋白、固相改性衍生和富集糖肽的方法，首先合成具有二氧戊环、胺基和羧基官能基团化合物6，然后将化合物与带有胺基硅胶通过还原胺化反应，得到与硅胶共价结合的化合物7，再用Schiff‑base反应将丙二醛与化合物7共价结合得到化合物8，再与糖蛋白或糖肽共价结合形成9，经过处理的糖肽与酸性溶液孵化，室温下在二氧戊环初水解洗脱得到带有标记的糖肽10。本方法对研究唾液酸糖蛋白或糖肽在各种疾病中的变化等方面有着重要意义。

技术领域

本发明属于生物分子分析试剂技术领域，具体涉及酸水解化合物的合成及用于固相分析糖蛋白合成的方法。

背景技术

蛋白糖基化与多种疾病密切相关，研究表明蛋白糖基化定义肿瘤的恶性程度。人体体液中与肿瘤特异性的糖蛋白，往往可显示疾病发生、发展和进程。因此研究糖蛋白在肿瘤标志物的筛查中有非常重要的意义。分析糖蛋白通常使用富集糖肽，再使用质谱定性定量检测其结构和丰度。然而体液或者细胞表明糖蛋白，往往含有高表达的唾液酸，研究这些重要的糖基化，需要对唾液酸加以保护，提高唾液酸在样本处理和质谱检测中的稳定性。使用溶液方法与唾液酸反应，样本后处理比较困难，尤其是有α2,3和α2,6链接唾液酸溶液中两步法很难实现。固相上实现两步法衍生α2,3和α2,6链接唾液酸非常有效，但对分析糖肽由于与硅胶共价结合而无法从固相上释放。本研究合成一种化合物，通过化合物与糖肽N端共价结合，两步法衍生唾液酸后，酸解可将糖肽洗脱而全面富集糖肽，避免直接将糖肽与固相共价结合造成糖肽信息的不完整，从而提高糖基化鉴定。

因此，针对上述问题，有必要提出进一步的解决方案。

发明内容

本发明目的是提供一种酸水解化合物的合成方法及其用于固相耦合糖蛋白、固相改性衍生和富集糖肽的方法，以解决现有技术中分析唾液酸糖肽的局限性。

本发明的技术方案是：一种酸水解化合物的合成方法，该方法包括如下步骤：

(a)将化合物原料1乙酰丙酸与甲苯基BnO，在DMF中混合并室温条件下反应4-6小时得到中间产物2；

(b)将所述中间产物2与C₁₈H₁₉NO₄溶于DMF，并在室温条件下反应6-12小时，得到中间产物3；

(c)将所述中间产物3溶解在DMF中，加入哌啶室温条件下反应4-6小时得到中间产物4；

(d)将所述中间产物4溶解在DMF中，加入Fmoc-Sarosine，在室温条件下混合反应4-6小时，得到中间产物5；

(e)将所述中间产物5在Pd/C作用下得到具有二氧戊环、胺基和羧基官能基团的化合物6；

上述反应过程的化学式如下：

进一步的，在步骤(a)中，所述化合物原料1乙酰丙酸与所述甲苯基BnO的摩尔比为1：1。

进一步的，在步骤(b)中，所述中间产物2与所述C₁₈H₁₉NO₄的摩尔比为1：1。

进一步的，在步骤(c)中，所述中间产物3与所述哌啶的摩尔比为1：1。

进一步的，在步骤(d)中，所述中间产物4与所述Fmoc-Sarosine的摩尔比为1：1。

本发明的另一技术方案是：一种酸水解化合物用于固相耦合糖蛋白方法，该方法包括如下步骤：

(a)将化合物6与带有胺基的硅胶通过还原胺化反应，得到与硅胶共价结合的化合物7；

(b)用Schiff-base反应将丙二醛与所述化合物7共价结合得到固相上基团8；