[发明专利]一种牛支原体MbovP701蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及动物传染病防治技术领域，尤其涉及一种牛支原体MbovP701蛋白及其制备方法与应用。本发明的MbovP701蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，编码该蛋白的核苷酸如SEQIDNO：2所示。本发明的MbovP701蛋白在Mg²⁺存在条件下具有降解外源双链DNA的核酸外切酶功能，且为非经典的分泌蛋白，可以分泌至胞体外发挥核酸外切酶的作用，为牛支原体生长提供必需的营养物质。因此该蛋白可作为分子靶标，应用于制备牛支原体防治药物。

技术领域

本发明涉及动物传染病防治技术领域，尤其涉及一种牛支原体 MbovP701蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)属于古柔膜体纲(Mollicutes)， 支原体目(Mycoplasmatles)，支原体科，支原体属，是引起肉牛和奶牛多 种疾病的重要病原体。牛支原体感染主要导致牛肺炎，也可致乳腺炎、关节 炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种病症。随着全球化 一体化的发展，牛支原体已呈全球流行的趋势。在法国，其患有肺炎的牛场 中牛支原体的分离率30％；在英国，其患有肺炎的牛场中牛支原体抗体阳性 率为20％-25％；在爱尔兰，其患有肺炎的牛场中牛支原体的分离率为 13％-23％。有研究表明牛支原体肺炎的爆发与运输应极密切相关，临床上对 于牛支原体病的预防主要通过加强饲养管理，减少长途运输等应激因素造成 的影响。

目前尚缺乏特异性防控手段用于牛支原体病的防治，而创制特异性防控 措施需要特异性分子靶标。确定牛支原体的毒力相关因子是发现牛支原体特 异性靶标的前提。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牛支原体MbovP701蛋白及其制备方法与应 用，本发明的牛支原体MbovP701蛋白有望作为特异性的分子靶标，应用于 牛支原体病的防治中。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种牛支原体MbovP701蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如 SEQ IDNO：1所示；

编码所述蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了所述的牛支原体MbovP701蛋白的制备方法，包括如下 步骤：

(1)将Mbov_0701基因457、841位的TGA密码子突变为TGG，得 到SEQ ID NO：2所示的基因序列；

(2)将SEQ ID NO：2所示的基因序列构建重组表达质粒，并转入大 肠杆菌DH5α中，得到大肠杆菌DH5α(pET-30a-Mbov_0701)；

(3)提取大肠杆菌DH5α(pET-30a-Mbov_0701)中的质粒，转化入表达 菌株中，诱导表达，得到牛支原体MbovP701蛋白。

作为优选，所述Mbov_0701基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

作为优选，所述大肠杆菌DH5α(pET-30a-Mbov_0701)，拉丁文名称为 Escherichiacoli DH5α(pET-30a-Mbov_0701)，保藏于中国典型培养物保藏 中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2020年9月25日，保藏编 号为CCTCC NO：M 2020542。

作为优选，所述的表达菌株为大肠杆菌BL21。

作为优选，所述诱导表达的诱导剂为异丙基硫代半乳糖苷。

作为优选，所述诱导表达的温度为35～39℃，诱导表达的时间为 2.5～3.5h。

本发明还提供了所述的牛支原体MbovP701蛋白作为分子靶标在制备牛 支原防治药物中的应用。