[发明专利]通用型钙制剂在神经干细胞分化调节上的应用

权利要求书

1.以非诊断和治疗目的的通用型钙制剂在神经干细胞分化调节上的应用，包括步骤如下：

1）将神经干细胞接种于神经干细胞分化培养基中；神经干细胞的接种量为（1-10）×10⁶个/mL；

2）将通用型钙制剂加入步骤1）的培养体系中进行神经干细胞的培养和胞吞，所述的通用型钙制剂为羟基磷灰石纳米棒或磷酸钙纳米颗粒，获得钙制剂修饰的神经干细胞；加入通用型钙制剂后，体系中通用型钙制剂的浓度为50-200μg/mL；神经干细胞的培养和胞吞为将加入钙制剂的培养体系置于36-37℃的培养箱中孵育1-14天；

羟基磷灰石纳米棒是按如下方法制得：

（1）先将十八胺、油酸和乙醇混合均匀，加入NaF、Na₃PO₄和硝酸钙搅拌，得混合溶液，NaF、Na₃PO₄和硝酸钙的物质的量之比为0.1～0.5：1.2：1.4，硝酸钙与十八胺的物质的量之比为1：0.1～10，硝酸钙与油酸的物质的量之比为1：1～10，乙醇的加入量占混合溶液总体积的1/4～2/3；

（2）将混合溶液转移到密闭反应器中，在120～220℃下反应8～15小时后，自然冷却至室温；

（3）将产物分散在环己烷中，离心，然后用环己烷、乙醇先后清洗三次，最后分散在乙醇中，制得羟基磷灰石纳米棒；

磷酸钙纳米颗粒是按如下方法制得：

a、将环己烷、Trion-X100、己醇混合均匀得混合液，将混合液平均分成两份，其中一份加入氯化钙溶液，得到氯化钙混合液；另外一份加入磷酸氢二钠溶液，得到磷酸氢二钠混合液；环己烷、Trion-X100、己醇的体积比（4-6）：（1-2）：（3-5）；其中一份混合液与氯化钙溶液的体积比为8：1，另一份混合液与磷酸氢二钠溶液的体积比为8：1；氯化钙溶液的浓度为35mg/ml, 磷酸氢二钠溶液的浓度为111mg/ml；

b、将磷酸氢二钠混合液逐滴加入氯化钙混合液中，反应0.5-2h，离心，得到磷酸钙纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤1）中，所述的神经干细胞分化培养基为基础培养基Neurobasal培养基、体积浓度为1-3%的Gibco B-27神经细胞培养无血清添加剂，体积浓度为1-2％的GlutaMAX^TM-I、体积浓度为1-2％的胎牛血清FBS和体积浓度为1-2％的双抗。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤2）中，羟基磷灰石纳米棒的具体制备方法如下：

1）将0.6g十八胺溶解在7ml油酸中，80℃加热30min，剧烈搅拌下加入20mL乙醇；

2）加入1.4mL的0.2M NaF、7mL的0.168M Na₃PO₄，搅拌5min；

3）然后加入7mL 0.2M的Ca(NO₃)₂溶液并搅拌1min，得混合溶液，

4）混合溶液在180℃下加热反应12h，自然冷却至室温；

5）将产物分散在环己烷中，10000rpm离心10min，然后用环己烷、乙醇先后清洗三次，最后分散在乙醇中备用。