[发明专利]一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条，包括：PVC底板、设置于所述PVC底板上的样品垫、与所述样品垫相邻设置的结合垫及与所述结合垫相邻设置的吸水垫；所述结合垫与PVC底板之间设置有硝酸纤维素膜层，所述结合垫上设置有检测线与质控线。根据本发明，可用于检测蜡样芽孢杆菌的免疫原，检测的灵敏度高。

技术领域

本发明涉及微生物检测的技术领域，特别涉及一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条。

背景技术

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种革兰氏阳性菌，可引起人和动物患病。据国家食源性疾病监测网的数据分析，我国每年发生数十起蜡样芽孢杆菌食物中毒事件，约占细菌性食物中毒事件总数的11.4％，造成数百人发病，而这个数字可能远低于实际发生中毒的人数。蜡样芽孢杆菌感染可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻等，严重者可引起电解质紊乱、出血性腹泻。该致病菌主要存在于米制品、肉制品、乳制品等成品及其半成品中。在食物的生产、加工和运输中，由于交叉感染，易导致蜡样芽孢杆菌感染事件的大规模爆发。因此，蜡样芽孢杆菌的检测至关重要。

目前，蜡样芽孢杆菌检测主要依赖于国标规定的传统培养法及生化鉴定，其被视为蜡样芽孢杆菌检测的金标准，但是，检测周期长、操作繁琐，不适合大量样品的检测。此外，实验室常用的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)进行蜡样芽孢杆菌的检测，其灵敏度高，但是依赖专业的设备和操作人员且操作时间较长。免疫学检测由于其检测周期短、操作简便、灵敏度较高，近年来成为发展迅速的检测手段。但是，我国目前尚未拥有可以用于蜡样芽孢杆菌快速检测的产品。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明的目的是提供一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条，可用于检测蜡样芽孢杆菌的免疫原，检测的灵敏度高。为了实现根据本发明的上述目的和其他优点，提供了一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条，包括：

PVC底板、设置于所述PVC底板上的样品垫、与所述样品垫相邻设置的结合垫及与所述结合垫相邻设置的吸水垫；

所述金标垫与衬垫之间设置有硝酸纤维素膜层；

所述结合垫上设置有检测线与质控线。

优选的，所述检测线及质控线设置于所述硝酸纤维素膜层上，且检测线靠近样品垫，质控线靠近吸水垫。

优选的，所述检测线和结合垫上胶体金标记的单克隆体抗体，其单克隆抗体由保藏号为2B9的杂交瘤细胞株分泌产生，所述质控线由羊抗鼠抗体构成。

优选的，所述与胶体金偶联的单克隆体抗体中的制备的胶体金粒径为30-40nm，胶体金与单抗的质量体积比为36μg/mL，胶体金偶联抗体和构成检测线的抗体为同一单克隆抗体。

一种蜡样芽孢杆菌免疫胶体金快速检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：

S1、进行胶体金的制备；

S2、确定胶体金标记抗体最优pH；

S3、确定胶体金偶联抗体的最佳结合量；

S4、对抗体进行胶体金标记；

优选的，所述步骤S1包括：

S11、取氯金酸粉末加入灭过菌的双蒸水，配成氯金酸溶液；

S12、取二合水柠檬酸三钠，溶解到，双蒸水中配成柠檬酸三钠溶液，现配现用；

S13、双蒸水的烧瓶中，调节磁力搅拌器温度到150℃，搅拌速率为500rpm，加热至沸腾，立即加入氯金酸，沸腾15s，充分搅拌同时迅速加入1％的柠檬酸三钠，停止加热，冷却至室温，分装后避光保存。