[发明专利]一种用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组和试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于德尔塔冠状病毒巢式RT‑PCR检测的引物组和试剂盒，属于病毒分子生物学检测技术领域。本发明提供的用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT‑PCR检测的引物组，包括外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物；所述外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:4所示。本发明提供的用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT‑PCR检测的引物组具有特异性强、灵敏度高、检测速度快的优势。

技术领域

本发明属于病毒分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种用于德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组和试剂盒。

背景技术

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种会造成猪尤其是哺乳仔猪出现腹泻为主要症状的病毒，具有很高的致病力。PDCoV为冠状病毒科、δ冠状病毒属，是有囊膜、不分节段的单股正链RNA病毒，其病毒粒子与其他冠状病毒相似，呈多形性。PDCoV是目前已知冠状病毒家族中最小的，基因组全长约为25.4kb。PDCoV可以感染不同生长阶段的猪群，其中以哺乳仔猪感染率最高。因此，建立快速、特异性强确、高灵敏度的检测方法对预防和控制该病毒的发生具有重要意义。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种用于德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组和试剂盒。采用本发明提供的用于德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组具有特异性强、灵敏度高、检测速度快的优势。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组，所述引物组包括外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物；所述外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～SEQ IDNO:4所示。

本发明提供了一种用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的试剂盒，包括上述技术方案中所述的引物组。

优选的，所述试剂盒还包括2×One-Step Reaction Mix和One-Step Enzyme Mix；或者包括Anchored Oligo(dT)₁₈、2×TS Reaction Mix、RT/RI Enzyme Mix和2×EasyTaqPCR SuperMix。

优选的，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。

优选的，所述阳性对照品包括猪德尔塔冠状病毒目的片段的阳性质粒；所述阴性对照品包括DEPC水。

本发明提供了上述技术方案中所述的引物组或上述技术方案中所述的试剂盒在非诊断目的猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测中的应用。

有益效果：

本发明提供了一种用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组，所述引物组包括外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物；所述外侧上游引物、外侧下游引物、内侧上游引物和内侧下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～SEQ IDNO:4所示。本发明提供的用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组通过使用外侧、内侧2对特异性引物进行，大大提高了RT-PCR扩增的特异性，有效避免了非目的片段的扩增；同时，经过2轮扩增反应，灵敏度得到显著提高，大大提高了阳性样本的检出率；另外，本发明提供的引物组检测用时短，非常适于企业生产研发和农业生产的快速检测。因此，本发明提供的用于猪德尔塔冠状病毒巢式RT-PCR检测的引物组具有特异性强、灵敏度高、检测速度快的优势。

附图说明

图1为实施例2猪德尔塔病毒检测结果；

图2为实施例2中猪德尔塔病毒特异性测定结果；

图3为实施例3的第一轮扩增的灵敏度测定结果；