[发明专利]一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.构建深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的重组表达质粒；

S2.重组表达深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；

S3.亲和纯化深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；

S4.凝胶电泳实验检测深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的单链DNA结合活性。

2.根据权利要求1所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1.构建深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的重组表达质粒：

基于深海热液微生物样本的宏基因组信息和深海古菌单链DNA结合蛋白SSB基因序列，进行蛋白活性位点改造，并优化改造后的深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的稀有密码子，采用全基因合成技术合成深海古菌单链DNA结合蛋白SSB基因，并将该基因克隆到原核表达载体中，构建深海古菌单链DNA结合蛋白SSB重组表达质粒；

S2.重组表达深海古菌单链DNA结合蛋白SSB：

将构建的深海古菌单链DNA结合蛋白SSB重组表达质粒转化到宿主中，得到深海古菌单链DNA结合蛋白SSB重组表达菌株；再利用诱导剂启动深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的诱导表达；

S3.亲和纯化深海古菌单链DNA结合蛋白SSB：

将表达了深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的菌体，重悬于非变性蛋白裂解液，超声波破碎菌体，离心收集深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的大肠杆菌裂解上清液；再利用固定化镍离子亲和色谱获得电泳纯的深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；

S4.凝胶电泳实验检测深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的单链DNA结合活性：

将不同浓度的深海古菌单链DNA结合蛋白SSB与荧光标记的单链DNA，保温处理，利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测其结合单链DNA的能力。

3.根据权利要求2所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述原核表达载体为pET28或其它原核表达载体。

4.根据权利要求2所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述宿主为大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)、BL21(DE3)pLySs中的至少一种。

5.根据权利要求2所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述诱导剂为IPTG。

6.根据权利要求5所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，所述的利用诱导剂IPTG启动深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的诱导表达的具体条件为：先将深海古菌单链DNA结合蛋白SSB重组表达菌株培养至OD₆₀₀＝0.6-1.0，再加入0.02-1mmol/L诱导剂IPTG培养，进行诱导表达。

7.根据权利要求6所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，所述培养条件为25-37℃温度下培养3-6h或12-25℃温度下培养12-24h。

8.根据权利要求2所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述保温处理条件为25-37℃保温5-30min。

9.一种如权利要求1-8任一项权利要求所述的制备方法制得的深海古菌单链DNA结合蛋白SSB，其特征在于，所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。

10.如权利要求9所述深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的应用，其特征在于，所述应用包括PCR制备DNA聚合酶和LAMP等温核酸扩增反应。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述DNA聚合酶包括Taq DNA聚合酶、KODDNA聚合酶、Bst DNA聚合酶。