[发明专利]一种日本鳗鲡细胞因子IL-6基因启动子及其应用

说明书

本发明涉及一种日本鳗鲡细胞因子IL‑6基因启动子及其应用。通过IL‑6基因开放阅读框第一外显子序列比对分析日本鳗鲡基因组，对分析预测IL‑6基因5’侧翼区序列进行降落PCR方法克隆了IL‑6基因启动子序列，成功构建了IL‑6基因启动子pGL3‑IL‑6‑pro荧光素酶报告质粒。实验证明IL‑6基因启动子可被poly I:C、LPS以及嗜水气单胞菌诱导激活，并且发现重要信号通路炎症调控因子Caspase‑1能够显著上调IL‑6基因启动子的荧光素酶活性。本发明为研究日本鳗鲡细胞因子IL‑6基因的表达调控机制以及重要鱼类炎症相关NF‑κB、MAPK、以及I型干扰素信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统，同时也可以利用该启动子构建表达载体后高效表达外源基因，或将该启动子应用于转基因鱼的构建，具有重要的理论和实际意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及日本鳗鲡细胞因子IL-6基因启动子及其应用。

背景技术

白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)是一种重要的炎症早期细胞因子，在炎症反应中起着重要的作用，主要是由单核细胞、巨噬细胞、Th2型细胞和成纤维细胞产生(杨汉春.动物免疫学[M].北京:中国农业大学出版社,2003)。IL-6生物学功能主要是可以通过促进B细胞分化和产生免疫球蛋白、诱导肝细胞生成急性期反应蛋白以及促进T细胞成熟等，在介导先天性和适应性免疫应答中发挥重要作用。已有研究表明经嗜水气单胞菌、LPS、polyI:C等多种外源因子刺激后鱼类IL-6基因表达水平显著升高，表明IL-6在鱼类抗细菌和病毒免疫应答过程中发挥重要作用(Fu,X.,Z.Ding,J.Fan,H.Wang,F.Zhou,L.Cui,C.Boxiang,W.Wang and H.Liu(2016).Characterization,promoter analysis andexpression of the interleukin-6 gene in blunt snout bream,Megalobramaamblycephala.Fishphysiology andbiochemistry 42(6):1527-1540.；Kong,H.J.,B.-H.Nam,Y.-O.Kim,W.-J.Kim,H.K.Cho,C.H.Lee,S.-J.Lee andK.-K.Kim(2010).Characterization of the flounder IL-6 promoter and its regulation by the p65NF-κB subunit.FishShellfish Immunology28(5):961-964.；Bird,S.,J.Zou,R.Savan,T.Kono,M.Sakai,J.Woo and C.Secombes(2005).Characterisation and expressionanalysis of an interleukin 6homologue in the Japanese pufferfish,Fugurubripes.DevelopmentalComparative Immunology 29(9):775-789.)。鱼类IL-6基因表达调控主要在转录水平上进行，其中IL-6基因启动子发挥关键的转录调控作用。