[发明专利]一种高忠实性DNA聚合酶及其制备方法和PCR应用

权利要求书

1.一种高忠实性DNA聚合酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种编码权利要求1所述高忠实性DNA聚合酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列表如SEQ ID NO.2所示。

3.含权利要求1所述高忠实性DNA聚合酶的重组表达菌。

4.根据权利要求3所述的重组表达菌，其特征在于，所述重组表达菌为大肠杆菌。

5.一种如权利要求1所述高忠实性DNA聚合酶的基因的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对权利要求3所述重组表达菌进行扩大培养、诱导表达；

(2)收集诱导培养后的菌体，进行细胞破碎、离心，得到细胞裂解液上清；

(3)对上清液进行镍离子亲和纯化和离子交换纯化，得到所述DNA聚合酶。

6.一种如权利要求1所述高忠实性DNA聚合酶在PCR中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PCR应用中包含PCR反应缓冲液。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述PCR反应缓冲液含20mM Tris-HCl或pH值为8.2的Tricine-NaOH，3mM MgCl₂，40mM KCl，4mM(NH₄)₂SO₄，0.01％Triton X-100和0.005％BSA。