[发明专利]CRYBB2基因突变体、多肽、试剂盒、构建体及重组细胞

说明书

本发明属于生物基因工程技术领域，公开了一种CRYBB2基因突变体、多肽、试剂盒、构建体及重组细胞，所述CRYBB2基因突变体的核酸是第4号外显子的223位核苷酸，存在G→A突变；所述多肽具有p.E75K突变，由所述编码CRYBB2突变体核酸编码得到；所述用于筛选易患先天性白内障的生物样品的试剂盒含有特异检测CRYBB2基因突变体p.E75K的试剂；所述核酸构建体含有CRYBB2基因p.E75K突变体；所述重组细胞由所述的含有CRYBB2基因p.E75K突变体的核酸构建体转染受体细胞而获得。本发明可以用于先天性白内障的辅助诊断，用于发现遗传性白内障的潜在携带者，为该病的产前基因诊断提供依据。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，尤其涉及一种CRYBB2基因突变体、多肽、试剂盒、构建体及重组细胞。

背景技术

目前，先天性白内障是一种严重的致盲性晶状体疾病，是由于胚胎期晶状体代谢异常而导致其自身透明度下降的疾病，主要表现为发生于婴幼儿期的白瞳症。临床上先天性白内障可表现为核性、前级、后极等形状各异的晶状体浑浊。白瞳症是新生儿中最常见的先天性白内障表现形式，不完全性白内障则常常以视力低下、斜视、眼球震颤等异常就诊。此病发病率约为0.01％～0.06％，占儿童致盲眼病第二位。遗传、新陈代谢、创伤和感染因素都可能导致儿童白内障。在这些原因中，遗传性白内障占全球儿童白内障的22.3％，最常见的遗传方式为常染色体显性遗传。

CRYBB2作为导致先天性白内障的致病基因之一，其致病突变较为罕见，到目前为止，国内外共发现32个致病突变，以点突变导致的错义突变和无义突变为主，近90％位于CRYBB2基因的第5、6外显子内，影响CRYBB2编码蛋白产物的稳定性。

以先天性白内障家系为研究对象，用全外显子组测序、Sanger测序和限制性酶切片段长度多态性技术，鉴定了CRYBB2基因中的一个新的杂合致病突变，位于第4号外显子的223位编码核苷酸，存在G→A突变。目前国际上还没有关于CRYBB2基因E75K突变导致先天性白内障的报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前国际上没有CRYBB2基因E75K突变导致先天性白内障的报道，缺乏CRYBB2基因该新发变异编码多肽的功能数据，影响新发变异的致病性评级，阻碍了该病临床诊断的确立和相关家庭的再生育产前基因诊断的进行。

解决以上问题及缺陷的难度为：目前没有直接可利用的带有特定突变的CRYBB2基因的构建体用于体外功能研究；缺乏带有特定突变的CRYBB2多肽；没有带有特定突变构建体的重组细胞，这几个问题均阻碍了CRYBB2基因新发变异的致病性评级。

解决以上问题及缺陷的意义为：以上问题的解决可以明确先天性白内障表型相关的CRYBB2基因中新发变异的致病性，为明确患者的分子遗传学诊断、指导患者的精准治疗及其避免该家系的再生育风险有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种CRYBB2基因突变体、多肽、试剂盒、构建体及重组细胞。

本发明是这样实现的，一种CRYBB2基因突变体，所述CRYBB2基因突变体的核酸是第4号外显子的223位核苷酸，存在G→A突变，序列为SEQ ID NO：3。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述的CRYBB2基因突变体的多肽，所述多肽具有p.E75K突变，由所述CRYBB2突变体的核酸编码得到，氨基酸序列为SEQ ID NO：4。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述的CRYBB2基因突变体的用于筛选易患先天性白内障的生物样品的试剂盒，所述用于筛选易患先天性白内障的生物样品的试剂盒含有特异检测CRYBB2基因突变体p.E75K的试剂。

进一步，用于扩增CRYBB2基因外显子4的引物：