[发明专利]一种绿色荧光蛋白Clover4及其衍生的基于生物发光共振能量转移的探针和应用

权利要求书

1.一种绿色荧光蛋白Clover4，其特征在于，所述绿色荧光蛋白的氨基酸序列与Clover的氨基酸序列相比，具有以下突变位点：S72A、Q80L、S86A、K101E、T153M、Q157A、R168Y、L178V、A206T、L221V、F223R；

所述绿色荧光蛋白Clover4的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

2.一种多核苷酸序列，其特征在于，所述的多核苷酸序列编码权利要求1所述的绿色荧光蛋白Clover4。

3.一种用于生物发光共振能量转移检测的蛋白对，其特征在于，其包括权利要求1所述的作为生物发光共振能量转移受体绿色荧光蛋白Clover4；蛋白对还包括共振能量转移供体；

所述生物发光共振能量转移供体选自荧光素酶。

4.一种基于生物发光共振能量转移的探针，其特征在于，所述基于生物发光共振能量转移的探针包括权利要求3所述的用于共振能量转移检测的蛋白对；

所述基于生物发光共振能量转移的探针还包括包含抗原表位的片段以及帮助结构域；

所述的帮助结构域选自SH3/sp1结构域。

5.根据权利要求4所述的探针，其特征在于，所述包含抗原表位的片段中的抗原表位选自病毒蛋白中的抗原表位片段。

6.根据权利要求4所述的探针，其特征在于，其中的荧光蛋白Clover4还选自：连接原始如SEQ ID NO.1所示的荧光蛋白Clover4的N端和C端，在荧光蛋白Clover4的其他位点打开肽链所形成的荧光蛋白Clover4环化重排衍生物；并在荧光蛋白Clover4衍生物打开位点的N端和C端连接帮助结构域以及包含抗原表位的片段；

打开的其他位点为157位或第173位。

7.权利要求1所述绿色荧光蛋白Clover4，或荧光蛋白Clover4的环化重排衍生物作为共振能量转移检测中共振能量转移供体中的用途；

所述荧光蛋白Clover4环化重排衍生物为：连接原始如SEQ ID NO.1所示的荧光蛋白Clover4的N端和C端，并在其他位点打开肽链所形成的环化重排衍生物；

打开的其他位点为157位或第173位。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述绿色荧光蛋白Clover4与生物发光共振能量转移供体配合使用，生物发光共振能量转移供体选自荧光素酶。

9.权利要求1所述的绿色荧光蛋白Clover4，或荧光蛋白Clover4的环化重排衍生物在制备基于共振能量转移检测的探针或试剂中的用途；

所述荧光蛋白Clover4环化重排衍生物为：连接原始如SEQ ID NO.1所示的荧光蛋白Clover4的N端和C端，并在其他位点打开肽链所形成的环化重排衍生物；

打开的其他位点为157位或第173位。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述绿色荧光蛋白Clover4与生物发光共振能量转移供体配合使用，生物发光共振能量转移供体选自荧光素酶。

11.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含权利要求4-6任一项所述基于生物发光共振能量转移的探针。

12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于血清检测用。

13.权利要求4-6任一项所述的基于生物发光共振能量转移的探针或权利要求3所述的蛋白对在制备检测血清中特定抗体的试剂中的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，所述的检测为定性检测或定量检测。