[发明专利]CYP4F22基因突变体、多肽、试剂盒、构建体及重组细胞

权利要求书

1.一种CYP4F22基因突变体，其特征在于，所述编码CYP4F22突变体的核酸是第8号外显子的844位核苷酸，存在C→T突变，序列为SEQ ID NO：3；或第11号外显子的1189位核苷酸，存在C→T突变，序列为SEQ ID NO：5。

2.一种应用如权利要求1所述的CYP4F22基因突变体的多肽，其特征在于，所述多肽具有p.R282W，序列为SEQ ID NO：4；或p.R397C突变，序列为SEQ ID NO：6。

3.一种应用如权利要求1所述的CYP4F22基因突变体的用于筛选易患先天性鱼鳞病的生物样品的试剂盒，其特征在于，所述用于筛选易患先天性鱼鳞病的生物样品的试剂盒含有特异检测CYP4F22基因突变体p.R282W或p.R397C的试剂。

4.如权利要求3所述的用于筛选易患先天性鱼鳞病的生物样品的试剂盒，其特征在于，所述试剂为核酸引物，所述核酸引物包括：

CYP4F22基因c.844C→T突变所在外显子8的扩增引物：正向SEQ ID NO：7；反向SEQ IDNO：8；

CYP4F22基因c.1189C→T突变所在外显子11的扩增引物：正向SEQ ID NO：9；反向SEQID NO：10。

5.一种应用如权利要求1所述的CYP4F22基因突变体的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体含有CYP4F22基因p.R282W或p.R397C突变体。

6.一种如权利要求5所述核酸构建体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

设计针对野生型CYP4F22 cDNA的全长的上下游扩增引物，上游引物带Kpn I酶切位点，下游引物带BamH I酶切位点，PCR方法扩增CYP4F22开放读码框序列并进行Kpn I和BamH双酶切与纯化；商业化的GFP表达载体(pAcGFP1-C1 vector)经Kpn I和BamH I双酶切并纯化后，与酶切纯化的CYP4F22开放读码框片段，经T4连接酶连接成环状双链DNA后，转化DH5α感受态细胞，接种于卡那霉素抗性的琼脂糖平板中过夜培养，挑取单克隆进行Sanger测序，鉴定pAcGFP1-C1-CYP4F22-WT的序列。利用构建好的pAcGFP1-C1-CYP4F22-WT野生型表达载体，通过定点突变法，分别构建p.R282W或p.R397C突变体；p.R282W突变体构建所用定点突变引物序列：正向SEQ ID NO：11，反向SEQ ID NO：12；p.R397C突变体构建所用定点突变引物序列：正向SEQ ID NO：13，反向SEQ ID NO：14。

7.一种应用如权利要求5所述的核酸构建体转染获得的重组细胞，所述重组细胞由所述的含有CYP4F22基因p.R282W或p.R397C突变体的核酸构建体转染受体细胞获得。

8.一种如权利要求7所述的重组细胞在筛选制备治疗先天性鱼鳞病的药物中的应用。