[发明专利]一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种和生产方法

说明书

本发明涉及发酵工程领域，特别是涉及一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种和生产方法。本发明所述菌种包括四川灵芝(ganoderma sichuanense)藏灵芝二号；所述藏灵芝二号的保藏编号CGMCC NO.21936。本发明利用藏灵芝二号生产灵芝漆酶，从而得到酶活力极高的灵芝漆酶，其酶活力是目前市售漆酶酶活力的50～100倍。

技术领域

本发明涉及发酵工程领域，特别是涉及一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种和生产方法。

背景技术

漆酶(Laccase，EC 1.10.3.2)是一种多酚氧化酶，属于蓝色氧化酶家族，是重要的木质纤维(ligno-cellulose)降解酶之一，最初发现于漆树漆液中，随后发现某些高等真菌也能分泌该酶。漆酶能催化降解多种芳香族化合物特别是酚类，是一种天然环保型酵素。而灵芝是一种食用菌，无任何毒副作用，灵芝漆酶的应用前景更为广阔，具有巨大的社会效益和经济效益。

目前，对于灵芝菌种生产灵芝漆酶的研究较少，且制备的灵芝漆酶酶活力较低，因此，亟需一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种。本发明的菌种得到的灵芝漆酶酶活力极高，其酶活力是目前市售漆酶酶活力的50～100倍。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种生产高酶活力灵芝漆酶的菌种，所述菌种包括四川灵芝(ganoderma sichuanense)藏灵芝二号；所述藏灵芝二号的保藏编号为CGMCCNO.21936。

本发明还提供一种生产高酶活力灵芝漆酶的方法，包括以下步骤：

将上述菌种进行扩繁培养，得到发酵菌种；所述扩繁培养包括菌种活化、摇床培养、一级放大和二级放大；

将发酵菌种接种到发酵培养基上进行发酵培养，得到酶活力为20.581～21.23U/ml的灵芝漆酶的粗酶液；

所述菌种活化的培养基包括以下重量份的组分：蛋白胨2～2.5份、葡萄糖20～25份、磷酸二氢钾0.4～0.5份、磷酸氢二钾1.0～1.2份、七水硫酸镁0.5～0.6份、维生素B10.01～0.02份、琼脂18～20份和水1000份；所述摇床培养的培养基为不含琼脂的菌种活化培养基；

所述一级放大的培养基、二级放大的培养基和发酵培养基均包括以下重量百分含量的组分：玉米淀粉2％～3％、葡萄糖1.5％～3％、磷酸二氢钾0.1％～0.2％、硫酸镁0.05％～0.1％、酵母粉0.2％～0.4％、豆油0.05％～0.1％和余量的水。

优选的，所述扩繁培养和发酵培养的温度均为26～28℃。

优选的，所述菌种活化的时间为20～30d。

优选的，所述摇床培养的时间为5～7d；所述摇床培养的振荡速度为100～200rpm。

优选的，所述发酵培养的条件包括：通气量为1～2V/V·min，搅拌速度为100～120rpm。

优选的，得所述粗酶液后，还包括提取和纯化处理；所述提取和纯化处理包括：压滤、硫酸铵沉淀、透析和层析；所述压滤的压力为50～60kg。

优选的，所述硫酸铵沉淀的方法包括：将压滤后得到的液体与40wt.％的硫酸铵混合，得到第一粗灵芝漆酶和上清液；

将上清液与80wt.％硫酸铵混合，得到第二粗灵芝漆酶和上清液；

将第一粗灵芝漆酶和第二粗灵芝漆酶混合，得到粗灵芝漆酶。

优选的，所述层析的装置包括葡聚糖G-100凝胶柱；所述层析的流速为0.5ml/min。