[发明专利]丛生真藓的组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种丛生真藓的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述丛生真藓的组织培养繁殖方法具体包括如下步骤：

(1)组培材料的野外采集获取：

根据丛生真藓的生境、分布、孢子成熟的时期和季节去野外调查和采集苔藓植物标本，记录标本有关信息，挑选出用于组织培养用的丛生真藓材料；

(2)组培前的植物材料处理：

将野外采集回来的丛生真藓材料放在牛皮纸上自然阴干，剔除掉标本中含有的杂质，显微镜下分类，鉴定，挑选组培用的丛生真藓材料，将植物剥离成单株，保存备用；

(3)材料清洗：

将备用丛生真藓材料用纱布包裹，在水龙头下用清水反复冲洗3～4小时，直至植物表面无明显泥沙，然后用蒸馏水浸泡并超声清洗2～3次，每次6分钟，清洗好的丛生真藓材料放到盛有少量蒸馏水的培养皿中，叶片舒展备用；

(4)培养基的配制：

配制Knop培养基、MS培养基和1/2 MS培养基，分别将培养基所需药品逐个称量溶解到1L蒸馏水中，添加一定量的蔗糖和激素，最后添加琼脂并在微波炉中加热5分钟使琼脂充分溶解，调节pH＝6，然后放入灭菌锅中灭菌；

(5)配子体消毒：

依次用质量百分数为75％的乙醇、质量百分数为1％的NaClO溶液和质量百分数为0.01％的HgCl₂溶液分别对丛生真藓处理30s；

(6)灭菌及接种：

将配制好的培养基、培养皿、镊子、剪刀及各种实验器具放入灭菌锅中，关闭锅盖，打开电源并开始灭菌工作；取出灭好菌的物品放入超净台中，超净台提前半小时打开紫外灯灭菌，待培养基稍微冷却，在没有完全凝固之前倒平板，平板厚度5～7mm；待培养基凝固后，将经过消毒的丛生真藓配子体材料接种到培养皿中，封口膜封口放入人工气候培养箱中培养；

(7)组培材料各个生长发育阶段的具体过程研究：

在显微镜下对组培材料各阶段发育的过程进行及时的细致观察、记录拍照，主要发育阶段包括原丝体的生长发育、芽体的形成与分化和配子体的形成；

(8)丛生真藓的土培：

丛生真藓的土培在生长前期两周时以蛭石为基质，丛生真藓到了生长后期一个月时，以草炭土或草炭土∶蛭石＝1∶1为基质进行土培；

丛生真藓原丝体再生体系的培养条件为：12h/d光周期、pH＝6.0的条件下，培养基的组成为1/2 MS+3.0％蔗糖+0.1mg/L 6-BA；丛生真藓配子体再生体系的培养条件为：16h/d光周期、pH＝6.0的条件下，培养基的组成为1/2MS+3.0％蔗糖+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IBA；

从生真藓的生长发育过程为：带有切口的外植体在培养基中先发育出原丝体，然后原丝体分枝生长形成绿丝体，然后在主轴上生长出茎叶分化不明显的芽体，由芽体逐渐发育为成熟的配子体。

2.根据权利要求1所述的丛生真藓的组织培养繁殖方法，其特征在于：培养基中植物激素0.1mg/L 6-BA替换为0.3mg/L IBA或1.0mg/L IBA。