[发明专利]一种HPLC-MS/MS联用同时检测人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法

说明书

本发明涉及一种HPLC‑MS/MS联用同时检测人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法，它包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱‑质谱联用检测；(3)人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的测定。采用本发明的检测方法，在血浆样品预处理时以埃索美拉唑作为内标，采用IC作为色谱柱进行梯度洗脱，可以直接分离左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑，样品配制简单，分析时间短，对检测设备要求低，具有检测所需血浆量少，重现性好、灵敏度高、分析速度快、基质效应影响小等优点，可用于评价将有利于药物的安全使用和注射用右兰索拉唑的一致性评价。

技术领域

本发明属于生物分析领域，具体涉及一种HPLC-MS/MS联用同时检测人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法。

背景技术

兰索拉唑为质子泵抑制剂。质子泵抑制剂为苯并咪唑类衍生物，特异性和非竞争性的作用于H+/K+-ATP酶，治疗消化性溃疡。质子泵抑制剂多为脂溶性弱碱性，吸收入血后进入壁细胞分泌小管、小管泡腔中酸性环境后，活化产物一般为活性次磺酸和次磺酰胺，与H+-K+-ATP酶巯基偶联形成一个不可逆的共价二硫键，阻断H+-K+转运机制，从而抑制胃酸分泌，主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食管炎、胃泌素瘤等消化性疾病的治疗，兰索拉唑不对称亚硫酰基中有一个手性中心，因此，有两个对映体：R-和S-兰索拉唑，R-兰索拉唑称为右旋兰索拉唑，与相同剂量的S-兰索拉唑相比较，右旋兰索拉唑表现出更高的体内药理学反应，因为，S-兰索拉唑体内清除比右旋兰索拉唑迅速。口服兰索拉唑后，右旋兰索拉唑是主要的循环对映体，约占血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)的85％。因为，口服右旋兰索拉唑后，血浆中未检测到S-兰索拉唑，所以人体内不会出现右旋兰索拉唑消旋转化为S-兰索拉唑。国外的体内药效学试验结果也表明，兰索拉唑的药理作用主要来自于它的R-(+)-对映异构体，即右旋兰索拉唑。

中国专利CN 111337615A公开液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度，在该专利中披露采用等度洗脱同时测定人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑浓度，分析时间为10min，分析时间较长，对检测设备的要求高，不适用于大批量生物样本的检测要求；在配制工作液时，采用的溶剂为含0.1％氨水的乙腈，由于氨水有刺激性的气味也易挥发，在检测的过程中给实验操作人员带来了危害，也干扰测定结果的准确性。

鉴于上述的缺陷，需开发更简单、可靠的样品预处理方法以及血浆药物浓度检测的方法，用于人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的同时测定。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种HPLC-MS/MS联用同时检测人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法，具有前处理所需血浆量少、操作简单、重现性好、灵敏度高、分析速度快、基质效应影响小，提取回收率高等优点。

本发明的技术方案如下：

一种HPLC-MS/MS联用同时检测人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的方法，它包括以下步骤：(1)人血浆样品前处理；(2)液相色谱-质谱联用检测，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，其中，流动相A为乙腈-水；流动相B为包含0.01～0.1％乙酸的3～7mM乙酸铵水溶液-乙腈；(3)人血浆中左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑的测定；梯度洗脱过程如下：在0-0.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为55:45；在0.5-4.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比由55:45匀速渐变至60:40；在4.5-4.6分钟内，流动相A和流动相B的体积比由60:40匀速渐变至90:10；在4.6-5.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比为90:10；在5.0-5.1分钟内，流动相A和流动相B的体积比由90:10匀速渐变至55:45；在5.1-6.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比为45:55；具体的梯度洗脱过程如表1：

表1左旋兰索拉唑和右旋兰索拉唑液相色谱梯度