[发明专利]一种人骨髓间充质干细胞体外扩增用添加剂及扩增方法

说明书

本发明公开了一种人骨髓间充质干细胞体外扩增用添加剂，所述添加剂加入至人骨髓间充质干细胞体外扩增基础培养基中使用，由以下成分组成：儿茶素、莽草酸、石杉碱甲、铌酸钾钠、丝素蛋白、bFGF、L‑谷氨酰胺、胰岛素。本发明提供添加剂中的莽草酸、石杉碱甲及铌酸钾钠和丝素蛋白等协同作用，显著提高人骨髓间充质干细胞的体外扩增速度，提高增殖效率，减少细胞老化，通过扩增培养得到的细胞还保持较好的分化潜能。本发明还提供了一种人骨髓间充质干细胞体外扩增方法，在基础培养基中加入本发明的添加剂作为扩增培养基，在短时间内可收获大量人骨髓间充质干细胞，为骨髓间充质干细胞的临床应用提供保障。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种人骨髓间充质干细胞体外扩增用添加剂及扩增方法。

背景技术

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）是骨髓基质的主要成份，为骨髓的造血功能提供支持。骨髓间充质干细胞具有较强增殖能力和多向分化潜能，能够在特定诱导条件下分化为成骨细胞或软骨细胞、成纤维细胞、神经元样细胞、肌细胞、脂肪细胞和内皮细胞，可进行自体移植而不存在组织配型和免疫排斥，在细胞移植、基因治疗和组织工程等领域具有广泛的应用前景。

骨髓间充质干细胞在应用于临床治疗和组织工程中需要大量细胞，但从骨髓中获取的干细胞数量有限，不能满足实际应用所需的细胞量，这就需要将骨髓间充质干细胞在体外进行扩增培养。现有的扩增培养过程存在诸多问题，如细胞增殖速度慢、活性差，细胞培养基中的部分添加物存在安全问题，如培养基中常用动物血清（胎牛血清）来提高细胞的增殖活性，但是动物血清来源自动物体内，其生物复杂性和不确定性增加了细胞制品生产及质量控制的难度，同时血清容易引起细菌、真菌、病毒等的污染，增加细胞制品的安全性隐患。在临床应用过程中需谨慎考虑。

在体外培养扩增过程中，骨髓间充质干细胞还易分化、老化而失去多向分化潜能，最终得到的细胞制品在临床应用时效果不理想，不能满足临床需求，限制了骨髓间充质干细胞的应用。因此需要改进骨髓间充质干细胞的扩增用培养基成分及扩增方法，实现骨髓间充质干细胞快速扩增并保持较好的分化潜能，以满足科研及临床应用的需要。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种人骨髓间充质干细胞扩增用添加剂，成分明确，可显著促进骨髓间充质干细胞的增殖，减少细胞老化，保持其分化潜能。

本发明的目的之二在于提供一种人骨髓间充质干细胞的扩增方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种人骨髓间充质干细胞体外扩增用添加剂，所述添加剂加入至人骨髓间充质干细胞体外扩增基础培养基中使用，由以下成分组成：儿茶素、莽草酸、石杉碱甲、铌酸钾钠、丝素蛋白、bFGF、L-谷氨酰胺、胰岛素。

进一步地，所述添加剂在培养基中的终浓度为：儿茶素5-10μg/mL、莽草酸1-5μg/mL、石杉碱甲2-7μg/mL、铌酸钾钠5-10ng/mL、丝素蛋白10-15ng/mL、bFGF 20-30 ng/mL、L-谷氨酰胺12-16μg/mL、胰岛素8-13μg/mL。

进一步地，所述添加剂在培养基中的终浓度为：儿茶素7μg/mL、莽草酸3μg/mL、石杉碱甲5μg/mL、铌酸钾钠8ng/mL、丝素蛋白12ng/mL、bFGF 25 ng/mL、L-谷氨酰胺14μg/mL、胰岛素10μg/mL。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种人骨髓间充质干细胞体外扩增方法，在基础培养基中加入上述添加剂进行扩增。

上述人骨髓间充质干细胞体外扩增方法包括以下步骤：

（1）取基础培养基加入儿茶素、莽草酸、石杉碱甲、铌酸钾钠、丝素蛋白、bFGF、L-谷氨酰胺、胰岛素混合均匀；