[发明专利]用于治疗子宫内膜损伤胶原支架复合人月经血干细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于治疗子宫内膜损伤胶原支架复合人月经血干细胞的制备方法，涉及组织工程和细胞治疗领域，包括将人月经血干细胞的培养，然后将培养所得人月经血干细胞与胶原支架复合，之后在长期的大鼠IUA模型中，首次鉴定了人月经血干细胞在大鼠子宫内膜90天的表达和细胞定位，且人月经血干细胞复合支架材料的治疗有效地促进子宫内膜子宫腺体再生和减轻子宫内膜纤维化，为月经血干细胞治疗宫腔粘连及其他子宫内膜损伤性疾病的长期临床应用提供了理论基础。

技术领域

本发明涉及组织工程和细胞治疗领域，是建立人月经血干细胞复合支架材料和用于长期治疗子宫内膜深度损伤模型大鼠的方法。

背景技术

育龄夫妇生殖健康问题却成了人口调整战略的一大阻碍，不孕不育发病率约为12.5％-15％，并有逐渐上升趋势。在这其中，子宫环境功能改变不仅引起了女性不孕，更是造成自然流产、出生缺陷等不良妊娠结局的重要原因。

子宫内膜是一个高度再生的组织,在月经周期中进行动态性,周期性的生长、分化、脱落和再生。子宫内膜作为胚胎发育的“土壤”,其再生对胚胎的着床和妊娠的维持至关重要。由于频繁的宫腔操作史、感染及部分药物的使用，子宫内膜损伤的发生逐渐增多，特别是子宫肌瘤剔除，子宫内膜炎或反复流产后清宫等导致的子宫内膜基底层破坏，造成子宫内膜重度损伤，再生修复困难，常引起子宫前后壁之间纤维瘢痕和子宫内膜粘连(Intrauterine adhesion，IUA)的形成。临床上可表现为，月经减少，闭经，不孕，习惯性流产，早产和胎盘异常等。有研究表明，近三分之二的胚胎种植失败是由于内膜因素所致。因此，对于重度子宫内膜损伤的治疗是临床上亟待解决的问题。因此对于子宫内膜损伤(包括IUA患者)，急需探索新的方法，修复和重建受损的子宫内膜，改善妊娠结局以及降低复发几率。子宫内膜的损伤程度可以利用以下技术手段确定：HE染色和细胞角蛋白CK-18水平增加提示子宫腺体数量增加和修复，而Masson染色和一型胶原(Collagen I)水平增加提示纤维化水平增高和子宫受损。

月经血干细胞(Menstrual blood mesenchymal stem cell,MBMSC)是近年来研究发现的新型干细胞，具有一般成体干细胞的自我更新和多向分化潜能。研究发现月经血干细胞作为目前众多来源中的优势种子资源，有着易采集、数量丰富、活力较强、分化能力接近胚胎干细胞等多项优势，在特定的体内外微环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞。月经血干细胞在子宫内膜损伤修复方面更具优势：(1)可能参与重建子宫内膜；(2)可通过简单、安全、无痛的方式获得；(3)数量丰富；(4)体外增殖能力强；(5)分泌细胞因子的能力强。因此，利用月经血干细胞修复损伤子宫内膜及其功能，具有理论基础，将是干细胞治疗子宫内膜损伤的重要细胞来源，具研究价值和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种人月经血干细胞复合胶原支架的制备方法，以解决现有技术中子宫内膜损伤修复困难的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

提供一种用于治疗子宫内膜损伤胶原支架复合人月经血干细胞的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、人月经血干细胞的分离、培养和鉴定；

步骤2、胶原支架预处理；

步骤3、人月经血干细胞复合胶原支架。

进一步，步骤3包括制备人月经血干细胞悬液，细胞浓度为1×10⁸个/mL，然后在预处理后的胶原支架上滴加悬液。

本发明相比现有技术具有以下优点：