[发明专利]HLA-E限制性HTNV结构蛋白特异性CD8+

说明书

本发明公开了HLA‑E限制性HTNV结构蛋白特异性CD8⁺T细胞表位肽及其聚合物和应用，所述的CD8⁺T细胞表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1～4所示。本发明提供的HTNV‑NP或‑Gn/Gc特异性的CD8⁺T细胞表位肽，是HLA‑E*0103分子限制性表位多肽，可诱导CD8⁺T细胞产生强烈的细胞免疫应答，分泌IFN‑γ，且分泌IFN‑γ的频率可用于指示HFRS患者病情严重程度，即分泌IFN‑γ的频率越高，HFRS疾病病情越轻。因此，可应用于表位肽疫苗的制备，或应用于诱导产生CD8⁺T细胞表位肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)，或应用于制备HLA‑E*0103/表位肽‑复合物四聚体，在HFRS特异性免疫治疗领域中有着良好的开发应用前景。

技术领域

本发明属于本发明属于汉滩病毒的防治技术领域，涉及HLA-E限制性HTNV 结构蛋白特异性CD8⁺T细胞表位肽及其聚合物和应用。

背景技术

汉滩病毒(Hantaan virus，HTNV)是布尼亚病毒目汉坦病毒科正汉坦病毒属(Hantavirus,HTV)的原型，也是引起急性发热性疾病肾综合征出血热(hemorrhagic feverwith renal syndrome,HFRS)的主要病原体之一。HFRS以发热、出血、渗出、低血压休克及肾功能严重损害为主要特征，是目前世界上分布最广、发病人数最多且危害极大的一种自然疫源性疾病，已成为全球关注的公共卫生问题之一。HFRS的主要临床表现包括发热、全身中毒症状、毛细血管损害及急性肾功能损伤，典型病例可有发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期五期经过，严重者通常出现低血压休克并容易在此阶段死亡。HFRS目前尚无特异性病原学治疗药物，临床治疗主要针对各期的病理生理变化进行综合性和预防性治疗，一般在感染早期对症治疗效果好，在晚期发现时病死率很高。尽管有关HFRS多种临床症状的病理生理学研究已有一些报道，但目前HFRS的发病机制仍不完全清楚。

1976年李镐汪等首先分离出的HTNV 76-118株是HTNV的代表株。HTNV 为单股负链RNA有包膜病毒，基因组包括L、M和S三个片段，分别编码RNA 聚合酶、糖蛋白(glycoprotein，分为Gn和Gc)以及核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)。因此NP和Gn/Gc均为HTNV的结构蛋白。其中，HTNV-NP包含 429个氨基酸，具有较强的免疫原性，其一级结构高度保守且存在多个抗原位点，能够诱导机体的体液免疫和细胞免疫应答。HTNV糖蛋白前体蛋白在细胞的内质网内切割并加工成为Gn和Gc两个成熟蛋白。HTNV-Gn/Gc全长包含1135个氨基酸，位于HTNV的囊膜表面，可刺激机体产生特异性的中和抗体，同时还可诱导动物产生保护性细胞免疫应答，提示Gn/Gc上同样存在着T细胞抗原表位，可诱导T细胞免疫应答。

CD8⁺T细胞(细胞毒性T细胞，cytotoxic T lymphocyte,CTL)是机体抗病毒感染免疫应答的主要效应细胞，病毒特异性CTL应答在彻底清除病毒、建立免疫记忆等方面发挥着重要作用。在病毒感染过程中，CD8⁺T细胞可通过TCR识别已被抗原提呈细胞(antigenpresenting cell,APC)处理并结合到主要组织相容性复合体(major histocompatibilitycomplex，MHC)-Ⅰ类分子上并表达于宿主细胞表面的病毒抗原，长度多为8-10个氨基酸，通过分泌颗粒酶和穿孔素杀伤靶细胞，或通过死亡受体-配体相互作用(如Fas-FasL)诱导靶细胞程序性死亡，从而清除已被病毒感染的细胞，限制病毒的复制和扩散，在机体细胞免疫系统抵御病毒感染过程中发挥着至关重要的作用。以往诸多研究均已经证实经典HLA-Ⅰ类分子限制性HTNV特异性CTL应答的效应功能在HFRS疾病发病及预后中发挥着重要的作用。而由非经典HLA分子限制的CD8⁺T细胞应答在病毒感染性疾病的发病中可能不仅发挥着抗病毒免疫保护作用，还具有重要的免疫调节功能。