[发明专利]一种敲除毒力相关基因的重组耻垢分枝杆菌菌株及其应用

说明书

本发明涉及一种敲除毒力相关基因Ms esat‑6的重组耻垢分枝杆菌菌株，简称rMs‑ΔE6，其保藏编号为：CCTCC M 2021462。本发明还涉及上述重组耻垢分枝杆菌rMs‑ΔE6用于预防和/或治疗结核病的疫苗及制剂中的应用。rMs‑ΔE6菌株在巨噬细胞中存活率降低，且rMs‑ΔE6诱导的免疫应答对Mtb感染的保护作用高于Ms。因此，rMs‑ΔE6不仅可作为更安全的疫苗载体，用于预防或治疗性疫苗的载体；还具有诱导抗Mtb保护性免疫应答的特性，可用于免疫治疗剂的研制，因而具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于结核病疫苗及免疫治疗领域。特别涉及一种敲除毒力相关基因Msesat-6的重组耻垢分枝杆菌菌株及其应用。

背景技术

结核病流行现状

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染引起的结核病(Tuberculosis，TB)仍然是世界范围内危害严重的传染病。据WHO估计，2019年全球新发TB人数1 000万，约140万人死于TB。目前，全球处于潜伏结核感染(latent tuberculosisinfection，LTBI)人群接近20亿，而5％～10％的潜伏感染者可转化为活动性TB，是成人TB的主要来源。我国新发TB人数仅次于印度，居全球第二位(WHO.Global tuberculosisreport.2020.)。TB是我国重点控制的重大疾病之一。

结核病疫苗研究现状

卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin vaccine，BCG)是将牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)接种于人工培养基、历时13年、连续传代230代获得的减毒活疫苗，是目前用于TB预防的唯一疫苗。BCG可有效预防儿童的严重TB，但对成人TB的总体保护效率在0％～80％不等。BCG具有良好的安全性，但作为减毒活疫苗，不能用于免疫低下人群接种(Fatima,S.,et al.,Tuberculosis vaccine:A journey from BCG to present.LifeSci,2020.252:p.117594.)。研究表明，BCG免疫保护效果降低，是因为其在传代中丢失了一些毒株特异性抗原，其引起的免疫保护不完善。此外，受环境中分枝杆菌的影响，不同地区疫苗株的差异、人群中个体的遗传多样性等多种因素导致BCG总体保护效果不理想(Schrager,L.K.,et al.,The status of tuberculosis vaccine development.LancetInfect Dis,2020.20(3):p.e28-e37)。因此，新型疫苗的研发对于TB流行的防控至关重要。

近年来，关于新型TB疫苗的研究很多，包括一系列候选疫苗的筛选和不同的疫苗免疫策略。据WHO报道，2020年已进入临床试验的TB疫苗共有14种，包括病毒载体疫苗、蛋白/佐剂亚单位疫苗、分枝杆菌裂解物以及分枝杆菌活菌疫苗。通过基因工程方法对Mtb或BCG等进行改良以降低毒株的致病力，或提高分枝杆菌减毒株/无毒株的免疫保护效力，是TB新疫苗构建及研究策略中的方向之一(Schrager,L.K.,et al.,The status oftuberculosis vaccine development.Lancet Infect Dis,2020.20(3):p.e28-e37)。