[发明专利]一种新型脑转移瘤动物模型的构建方法

说明书

本发明涉及动物模型构建技术领域，公开了一种新型脑转移瘤动物模型的构建方法。本发明构建方法包括以下步骤：分离小鼠颈部的左侧颈总动脉及左侧颈总动脉分支；将小鼠头位旋转，提起颈总动脉牵引丝线，再临时阻断颈总动脉；提起颈外动脉远心端，朝向近心端将肿瘤细胞悬液导入颈内动脉；肿瘤细胞悬液导入完毕后，关闭颈外动脉，开放颈总动脉。本发明的构建方法较好的模拟人类肿瘤脑转移的病理生理过程，减少造模术中出血量和肿瘤细胞外漏的几率，提高了造模成功率，降低了模型的死亡率；并且制备的脑转移瘤动物模型避免了多脏器转移，降低了小鼠全身肿瘤负荷，本发明的小鼠模型可用于脑转移瘤的转移机制和肿瘤微环境研究。

技术领域

本发明涉及动物模型构建技术领域，尤其是涉及一种新型脑转移瘤动物模型的构建方法。

背景技术

目前，脑转移瘤动物模型的构建方法是将肿瘤细胞悬液通过特定的途径注射入小鼠的动脉血循环，从而通过血流将肿瘤细胞送达脑组织内的毛细血管，最终肿瘤细胞穿透血脑屏障在脑实质内定植，或者通过直接颅内种植的方法，使实验小鼠形成转移瘤。现有注射方法包括：1.左心室注射，2.颈总动脉注射，3.立体定向颅内原位注射。左心室注射是依赖经验或B超引导下，通过小鼠肋间隙穿刺左心室，将肿瘤细胞悬液注射入左心腔。颈动脉注射是通过作颈部正中切口，解剖分离颈总动脉，穿刺并注射肿瘤细胞悬液。立体定向颅内原位注射是在立体定位仪的辅助下，参照小鼠脑解剖图谱，设定坐标后，将肿瘤细胞悬液注射到脑组织的目标区域。

上述现有的3种注射方法均存在如下的局限性。1.左心室注射法：小鼠心脏较小且心率高达600次/分，左心室穿刺成功率很大程度上依赖于操作者的经验，B超引导可提高穿刺成功率。但左心室穿刺容易引起出血，误入右心室，肿瘤细胞外漏，造成胸腔种植转移。成功注射入左心腔内的肿瘤细胞在心室内易受高速血流的剪切力作用而损伤，降低成瘤率，且注射入左心腔内的肿瘤细胞，会经体循环到达全身各处，产生多器官转移，脑转移效率低下。且小鼠全身肿瘤负荷较重，很快发生恶病质，在形成有效的脑转移病灶之前，小鼠可能死于全身衰竭。2.颈总动脉注射：通过穿刺颈总动脉将肿瘤细胞定向注射到脑循环内，可显著提高肿瘤的脑转移效率，同时避免了其他脏器出现转移瘤，减轻了全身肿瘤负荷。但小鼠颈总动脉较细，直径不超过1mm，即使是使用胰岛素针头(直径0.3mm)，穿刺对血管造成的损伤非常显著，常常导致拔针后的大出血，联合使用止血材料压迫止血有助于止血，但也增加了颈动脉血栓发生率，导致小鼠脑梗死，癫痫发作，增加了造模死亡率，其缺血缺氧环境也不利于肿瘤在颅内的进展。还有个不容忽视的问题：穿刺注射过程中或拔除穿刺针后几乎不可避免的肿瘤细胞外漏会导致肿瘤细胞在颈部种植，侵犯气管，增加模型小鼠的死亡率。3.立体定向颅内原位注射虽可有效的将肿瘤细胞送达脑组织内，但并不能模拟肿瘤脑转移的病理生理过程，而是通过直接接种的方式使肿瘤在脑组织内生长。穿刺造成的脑组织损伤对实验结果亦可造成一定的影响。因此，构建稳定高效，且符合病理生理过程的脑转移瘤动物模型是研究肿瘤脑转移机制以及肿瘤微环境的关键。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种新型脑转移瘤动物模型的构建方法，较好的模拟人类肿瘤脑转移的病理生理过程，减少造模术中出血量和肿瘤细胞外漏的几率，提高了造模成功率，降低了模型的死亡率；并且制备的脑转移瘤动物模型避免了多脏器转移，降低了小鼠全身肿瘤负荷，本发明的小鼠模型可用于脑转移瘤的转移机制研究，纯属用于科研，完全不涉及临床病例。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种新型脑转移瘤动物模型的构建方法，包括以下步骤：

分离小鼠颈部的左侧颈总动脉及左侧颈总动脉分支；将小鼠头位旋转，提起颈总动脉牵引丝线，再临时阻断颈总动脉；提起颈外动脉远心端，朝向近心端将肿瘤细胞悬液导入颈内动脉；肿瘤细胞悬液导入完毕后，关闭颈外动脉，开放颈总动脉。