[发明专利]一种布鲁氏杆菌基因工程亚单位疫苗及其制备方法和应用在审

申请号：	202110505138.7	申请日：	2021-05-10
公开（公告）号：	CN113354742A	公开（公告）日：	2021-09-07
发明（设计）人：	曹政;付文贵;付利芝;何丹;鲍伟;穆德龙;张月;龙小玲	申请（专利权）人：	重庆市畜牧科学院;重庆棠城畜牧科技有限公司
主分类号：	C07K19/00	分类号：	C07K19/00;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/12;A61K39/02;A61K9/19;A61K47/46;A61P31/04;C12R1/19
代理公司：	北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308	代理人：	黎昌莉
地址：	402460 重庆***	国省代码：	重庆;50
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摘要：
搜索关键词：	一种布鲁氏杆菌基因工程单位疫苗及其制备方法应用
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【权利要求书】：

1.一种布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白，其特征在于，所述布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的氨基酸序列由羊种Omp2a蛋白、羊种Omp2b蛋白、牛种Omp2b蛋白、猪种Omp2b蛋白、牛种Omp25蛋白、犬种Omp25蛋白、猪种Omp25蛋白、绵羊睾丸种Omp25蛋白、羊种Omp31蛋白、犬种Omp31蛋白、绵羊睾丸种Omp31蛋白、猪种Omp31蛋白、绵羊睾丸种Omp22蛋白、牛种Omp22蛋白、羊种Omp28蛋白、和牛种Omp28蛋白的氨基酸序列组成。

2.根据权利要求1所述的布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白，其特征在于，所述布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的氨基酸序列由羊种Omp2a蛋白的22-51位、144-158位；羊种Omp2b蛋白的233-245位、314-336；牛种Omp2b蛋白的4-29位；猪种Omp2b蛋白的41-53位；牛种Omp25蛋白的4-46位、187-197位、143-154位；犬种Omp25蛋白的87-94位；猪种Omp25蛋白的120-137位；绵羊睾丸种Omp25蛋白的10-27位；羊种Omp31蛋白的19-27位；犬种Omp31蛋白的4-14位；绵羊睾丸种Omp31蛋白的95-102位、224-237位；猪种Omp31蛋白的72-89位；绵羊睾丸种Omp22蛋白的157-177位；牛种Omp22蛋白的74-80位；羊种Omp28蛋白的240-247位和牛种Omp28蛋白的103-111位氨基酸序列组成。

3.根据权利要求1所述的布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白，其特征在于，所述布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白，其特征在于，所述布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种表达布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含权利要求4所述的布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的核苷酸序列。

6.一种利用权利要求5所述的重组质粒制备得到的基因工程菌株。

7.利用权利要求6所述的基因工程菌株制备得到的布鲁氏杆菌亚单位疫苗。

8.权利要求7所述的布鲁氏杆菌亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)发酵培养所述基因工程菌株；

(2)加入疫苗配制缓冲液重悬、破碎、离心得到上清液；

(3)将所述上清液纯化过滤得到疫苗配制用抗原溶液；

(4)添加冻干保护剂冷冻干燥得到布鲁氏杆菌亚单位疫苗。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述冻干保护剂由Tris 6.057g/L、EDTA0.146g/L、NaCl 2.922g/L、蔗糖100g/L、脱脂奶粉200g/L和水组成。

10.权利要求7所述的布鲁氏杆菌亚单位疫苗在制备抗布鲁氏杆菌抗体中的应用。