[发明专利]一种SARS-CoV-2的可视化LAMP同步检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测新型冠状病毒(简称新冠病毒)的环介导等温扩增引物组，由新冠病毒核衣壳(N)基因环介导等温扩增引物组构成，其特征在于，可用于新冠病毒检测的环介导等温扩增反应；所述新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组，其特征在于，由一对外引物(SARS-CoV-2-N-F3、SARS-CoV-2-N-B3)、一对内引物(SARS-CoV-2-N-FIP、SARS-CoV-2-N-BIP)组成，其引物序列为：

所述SARS-CoV-2-N-F3引物具有序列表SEQ.ID.No.1的核苷酸序列；

所述SARS-CoV-2-N-B3引物具有序列表SEQ.ID.No.2的核苷酸序列；

所述SARS-CoV-2-N-FIP引物具有序列表SEQ.ID.No.3的核苷酸序列；

所述SARS-CoV-2-N-BIP引物具有序列表SEQ.ID.No.4的核苷酸序列。

2.一种如权利要求1所述的新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组，用于新冠病毒检测试剂盒，主要由新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液、环介导等温扩增反应混合液、Bst 3.0DNA聚合酶、钙黄绿素-Mn²⁺染料混合液、新冠病毒N基因阳性质控品构成，其特征在于，可以采用可视化逆转录环介导等温扩增检测方法，进行新冠病毒的快速检测；所述新冠病毒N基因环介导等温扩增引物组溶液，其特征在于，是由一对内引物和一对外引物按一定的比例配制而成，其中内引物与外引物优选比例为4:1，反应终浓度外引物、内引物分别为：0.2μM、0.8μM；所述环介导等温扩增反应混合液，其特征在于，由dNTPs、甜菜碱、MgSO4和缓冲溶液等构成的一种商品化试剂盒2×Lamp PCR Master Mix(上海生物工程有限公司)；所述Bst 3.0DNA聚合酶,其特征在于除具有链置换活性以外，还具有逆转录活性，可催化逆转录环介导等温扩增反应；所述钙黄绿素-Mn²⁺染料混合液，其特征在于随着反应的进行，体系颜色可由棕黄色变为绿色，从而达到可视化的效果，其中钙黄绿素与Mn²⁺的比例为1:1，反应终浓度钙黄绿素、Mn²⁺分别为：25μM、1mM；所述新冠病毒N基因阳性质控品，其特征在于，是由涵盖上述引物扩增的N基因区域新冠病毒基因组；所述新冠病毒N基因环介导等温扩增试剂盒常规反应体系，包括环介导等温扩增引物组溶液5μL，环介导等温扩增反应混合液12.5μL，Bst 3.0DNA聚合酶0.5μL，钙黄绿素-Mn²⁺染料混合液1μL，待测试样或者阳性质控品1μL，用无酶水补至25μL。

3.如权利要求2所述的新冠病毒N基因可视化环介导等温扩增检测试剂盒，其特征在于，可通过反应前后颜色变化检测法进行新冠病毒检测；通过环介导等温扩增过程中产生焦磷酸根离子与Mn²⁺反应，使得被淬灭的钙黄绿素恢复原有的绿色，最适扩增温度为65℃。

4.如权利要求3所述的新冠病毒N基因可视化逆转录环介导等温扩增检测系统的扩增程序为：①65℃，60min，此步骤是为了完成整个扩增反应；②80℃，10min，此步骤是为了将酶灭活，达到最终反应的目的。