[发明专利]一种蛋白酶基因及其异源表达

说明书

本发明提供一种新型蛋白酶基因及其异源表达,所提供的蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明通过对南极土壤宏基因组文库阳性蛋白酶进行克隆筛选获得了一种新型的蛋白酶，该蛋白酶与已知蛋白酶相比不具有同源性。并将该蛋白酶在大肠杆菌中的异源表达，经分离纯化后获得了组分单一的纯酶制剂，从而为后续挖掘其更广泛的应用潜力的性质提供指导。

技术领域

本发明属于蛋白酶筛选技术领域，具体涉及一种蛋白酶基因及其异源表达方法。

背景技术

蛋白酶(EC 3.4.)也称为肽酶，可以催化蛋白质或肽类中肽键的降解，是目前生物技术产品市场上最重要的商业酶类，尤其在洗涤剂、食品、饲料、纺织和制药行业等领域具有广泛用途，因此，进一步挖掘新型蛋白酶基因不论是在理论研究方面，还是实际应用中都具有重要意义。

南极地区气候严寒，环境恶劣，生长在该地区的微生物由于长期适应如此苛刻的环境条件，造就了其在遗传和代谢产物上的多样性，是挖掘新型微生物蛋白酶基因的良好资源。但在目前实验室条件下，99％的微生物难以进行复苏和培养，极大限制了对于新酶的筛选和开发。

宏基因组学是利用现代基因组学技术和手段直接研究环境中的微生物群体，不需要通过传统的微生物个体分离和培养步骤，在DNA水平研究不可培养微生物，从中获得有价值的新型酶类和生物活性物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛋白酶基因及其异源表达，是对构建的宏基因组文库进行功能筛选，获得的蛋白酶基因，以及通过异源表达途径在大肠杆菌中实现了可溶性的上清表达，进一步纯化后获得了组分单一的目的蛋白酶。

本发明所提供的蛋白酶，其包含有：

1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的蛋白酶

MAGLMSDEGLLSSHAVAAERAEDGLPLLPKQPHFEATAKQVVHIFMNGGPSHVDTFDPKPSLDKYHGKPLPMANLRTERTTGAAMRSPFHFRKYGESGIEVSELFARTAQHIDDIAVVRSMQADVPNHEPSLMLMNCGDSILSRPSVGAWVTYGLGSENQNLPGFIAMCPRGYPVAAKKNWRAAFLPGAYQGTYVNPAIKNVERLLDNISNSEMSREEQRRQLDLVNLYNQRHLERRQQDSQLEARLQTFELAYRMQTEATDAFDVSQEPQHIQQLYGDGLPSRQLLITRRLLERGVRFVQVWSGEGQPWDAHGDLEENHRELARGWDQAIAGFLQDLKQRGLLKTTLVLWGGEFGRTPVAELPSLSGRDHNHYGFSIWLAGGGIRGGYVHGATDEFGFQAVDNPVHVHDLHATMLHLLGLDHERLTYRYAGRDFRLTDVYGNVVHSLIQ；

2)在1)的基础上，经过取代、缺失、添加一个或数个氨基，由1)所衍生的蛋白酶；

本发明还提供编码上述蛋白酶的基因，其一种具体的序列为SEQ ID NO:2：