[发明专利]一种大豆DGAT2基因外显子编辑位点及其应用

权利要求书

1.一种大豆DGAT2基因外显子的编辑位点作为编辑DGAT基因的靶标的用途，其特征在于，所述大豆DGAT基因的编辑位点为一段23个脱氧核糖核苷酸的DNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述大豆DGAT基因的编辑位点在大豆基因组的准确定位是09号染色体DGAT2基因的1号外显子，染色体的坐标为41998907-42006064。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述大豆DGAT2基因外显子的编辑位点3’端含有AGG，所述编辑DGAT基因为利用CRISPR-Cas9基因编辑技术，通过人工设计的sgRNA来识别目的基因组序列，并引导Cas9蛋白酶进行有效切割DNA双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入，最终达到对基因组DNA进行修饰的目的。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO：2所示。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)构建含有所述大豆DGAT2基因外显子的编辑位点的Cas9 sgRNA表达载体；

(2)将上述表达载体转化至发根农杆菌K599中，并侵染大豆子叶；

(3)除草剂加压筛选转基因系；

(4)PCR鉴定Cas9基因，测序验证靶点序列编辑情况。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述表达载体为以pLYCRISPR/Cas9载体为骨架构建插入有所述大豆DGAT2基因外显子的编辑位点序列的Cas9 sgRNA表达载体。