[发明专利]一种拟康氏木霉固态发酵的方法及其应用

权利要求书

1.一种拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

（1）拟康氏木霉液体菌种的制备：在无菌条件下，将拟康氏木霉接种于PDA平板培养基上培养，待菌丝长满整个培养皿，菌落表面产生绿色孢子后，用无菌水洗脱培养基上的孢子，无菌水稀释后，得拟康氏木霉液体菌种；

（2）固态发酵基质的制备：将酒糟、麦麸、营养液和水混合后，装于容器中，灭菌，得固态培养基；所述营养液组成为：(NH₄)₂SO₄ 1.4g/L、MgSO₄ 0.3g/L、KH₂PO₄ 2.0g/L、CaCL₂ 0.3g/L、FeSO₄ 5.0mg/L、MnSO₄ 1.6mg/L、ZnSO₄ 1.4mg/L和CoCL₂ 2.0mg/L；

（3）拟康氏木霉固态发酵：向固态培养基中接入拟康氏木霉液体菌种，光照培养，发酵结束后搅拌混匀，得拟康氏木霉固态发酵物。

2.根据权利要求1所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述步骤（1）是：在无菌条件下，将拟康氏木霉接种于PDA平板培养基上，27-29℃恒温培养5-7d后，待菌丝长满整个培养基，菌落表面产生绿色孢子后，用无菌水洗脱培养基上的孢子，用无菌水稀释孢子浓度为1.0×10⁶个/mL，得拟康氏木霉液体菌种。

3.根据权利要求1所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述步骤（2）是：将酒糟、麦麸、营养液和自来水混合后，装于250mL三角瓶中，经121℃高压灭菌20-30min，得固态发酵培养基。

4.根据权利要求1所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述步骤（3）是：向固态发酵培养基中接入拟康氏木霉液体菌种1.5mL，25℃光照培养6-7d，发酵结束后搅拌混匀，得拟康氏木霉固态发酵物。

5.根据权利要求1所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述酒糟为粉末玉米酒糟，其制作方法是将玉米酒糟经75-85℃烘干至恒重后，用粉碎机粉碎，得粉末玉米酒糟。

6.根据权利要求1所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述固态培养基中酒糟和麦麸的质量百分比为8-12%和14-18%；所述步骤（2）中，营养液和水的加入量是：每10g酒糟和麦麸的混合物中加入营养液1.8-2.2mL、加入自来水20-30mL。

7.根据权利要求6所述的拟康氏木霉固态发酵的方法，其特征在于：所述固态培养基中酒糟和麦麸的质量百分比为10.81%和16.21%；所述步骤（2）中，营养液和水的加入量是：每10g酒糟和麦麸的混合物中加入营养液2mL、加入自来水25mL。

8.根据权利要求1-7任一项所述的拟康氏木霉固态发酵的方法的应用，其特征在于：将拟康氏木霉固态发酵的方法制得的拟康氏木霉固态发酵物用于提高黄豆生长，改善黄豆生理和土壤环境质量。