[发明专利]脂肪间充质干细胞在制备治疗猫脂肪肝药物中的用途

说明书

本发明公开了脂肪间充质干细胞在制备治疗猫脂肪肝药物中的用途，属于制药领域。申请人通过制作FHL动物模型并静脉移植了ADSCs及其培养液冻干粉剂，结果发现，移植组能显著模型组动物的死亡率，病理组织学染色还表明，ADSCs及MSCM移植能显著减少肝脏病变，降低肝细胞中的脂质含量，对猫脂肪肝的治疗具有积极作用。因此，ADSCs对于猫脂肪肝具有很好的治疗效果，具有开发相关药物的潜力。

技术领域

本发明涉及脂肪间充质干细胞的制药新用途，尤其是制备治疗猫脂肪肝药物的新用途，属于制药领域。

背景技术

1.ADSCs简介及生物学特性

干细胞是未成熟的组织前体细胞，具有自我更新、形成克隆细胞群以及多潜能分化等的能力，干细胞疗法用于机体急慢性损伤后，再生修复受损的组织器官并重建其功能。根据细胞来源、发育阶段以及分化潜能，干细胞可分为胚胎干细胞、诱导多能干细胞以及成体干细胞三种类型。胚胎干细胞虽然具有发育的全能性及扩增的无限性，但其“非定位性”分化难以控制，容易导致畸胎瘤，同时细胞获取来源也存在伦理争议，阻碍了在临床疾病治疗上的应用。诱导多能干细胞技术尚在起步阶段，诱导效率低下，难以获得状态、质量稳定的干细胞制品。相较而言，成体干细胞包括造血干细胞(HSCs)、间充质干细胞(MSCs)、神经干细胞等(NSCs)，在体内广泛存在，取材方便，不涉及伦理问题且致瘤性低，是最具有临床应用前景的细胞类型。

HSCs是血液系统中的成体干细胞，它是目前研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，但异基因移植时免疫排斥需配型，且应用局限于治疗恶性血液病和肿瘤。NSCs存在于神经系统中，能够分化为神经元、星型胶质细胞及少突胶质细胞，对于开发治疗神经退行性疾病及脊髓损伤的疗法至关重要。与人类医学相比，HSCs和NSCs在兽医学中起的作用较小，主要是由于缺乏对应的移植和恢复条件，同时代价较为昂贵。相比之下，MSCs异体移植免疫原性较低，且近年来多种来源的MSCs分离培养及大规模制备技术逐渐成熟，利用MSCs来治疗各种急慢性损伤有望成为兽医再生医学的临床常规方法，是兽医临床转化医学理想的“种子细胞”。

迄今为止，已经成功地从各种组织，包括骨髓、脂肪、胎盘、脐带、牙髓等分离出了MSCs，目前最常用的MSCs来源是骨髓和脂肪组织，相较于其他组织，它们能提供更多的MSCs。脂肪间充质干细胞(ADSCs)与骨髓间充质干细胞(BMSCs)所表达的表面蛋白标志物基本相似，一样具有高度增殖和多向分化的能力，但ADSCs的增殖速率显著大于BMSCs，而且动物体脂肪储备丰富，取材微创，术后恢复迅速，并发症少，因此，对于临床应用而言，脂肪组织是首选的MSCs来源。

ADSCs的特性根据分离脂肪的位置不同而有所差异，而从腹股沟皮下分离的ADSCs可塑性最高。一般利用外科手术切取或吸脂术获取动物腹股沟皮下脂肪，运用酶消化法或组织贴块法接种培养细胞，通过不断换液除去未贴壁细胞而获得较纯的ADSCs。体外培养ADSCs形态上与成纤维细胞相似，主要表现为长梭形、纺锤形，常呈“旋涡状”排列，传代后，细胞逐渐纯化，3-4d可传代一次。ADSCs事实上并不是完全同质的细胞群体，是包含前脂肪细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等的不均匀混合物。目前尚未发现特异性的ADSCs表面抗原，它既有间质细胞的表面抗原，又有内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞的表面抗原，而且ADSCs的体外表型呈动态改变，随着传代次数的增加，部分标志物的表达增多或减少甚至丧失，例如CD34是ADSCs短期培养和原代培养鉴定的潜在标志物，但长期培养的ADSCs不表达CD34。因此，目前通常联合多种表面标志物对ADSCs进行鉴定，根据国际细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会(ISCT)的提出的标准，体外标准培养条件下MSCs具有塑料粘附性，MSCs不表达造血干细胞的表面抗原，如CD34、CD45、CD14等，95％阳性表达CD73、CD105和CD90等，在体外标准条件下能诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞，联合检测可作为分选和鉴定ADSCs的依据。

2.ADSCs的治疗潜力及医学进展