[发明专利]一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法及其检测方法有效
申请号: | 202110512265.X | 申请日: | 2021-05-11 |
公开(公告)号: | CN113176358B | 公开(公告)日: | 2022-04-29 |
发明(设计)人: | 徐英;任建洪;张永霞;谷从顺;戴贞丽;顾梦南 | 申请(专利权)人: | 苏州帕诺米克生物医药科技有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
代理公司: | 北京林达刘知识产权代理事务所(普通合伙) 11277 | 代理人: | 刘新宇;李茂家 |
地址: | 215000 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 代谢 脂质组学 研究 微量 样本 处理 方法 及其 检测 | ||
1.一种代谢组学和脂质组学研究用微量样本的前处理方法,其包括下列步骤:
1)向微量样本中加入单相提取溶剂,振荡并于室温进行单相提取,低温离心,取出部分上清液,即为代谢组学样本;
2)向剩余的上清液和残渣中加入双相提取溶剂,振荡并于冰浴中进行双相提取,低温离心,取出有机相,真空浓缩干燥,向浓缩物中加入复溶溶剂,涡旋混匀,低温离心,取出上清液,即为脂质组学样本;
在步骤1)中,
所述单相提取溶剂为甲醇;
所述微量样本与所述单相提取溶剂的用量比为1mg:5μL~1mg:8μL;
所述部分上清液与所述单相提取溶剂的体积比为1:2~1:5;
在步骤2)中,
所述双相提取溶剂由体积比为5:1:10的甲醇、盐酸和氯仿组成;
所述微量样本与所述双相提取溶剂的用量比为1mg:15μL~1mg:18μL;
所述复溶溶剂为甲醇和/或异丙醇;
所述微量样本与所述复溶溶剂的用量比为1mg:1.5μL~1mg:3μL。
2.根据权利要求1所述的前处理方法,其特征在于,在步骤1)中,
所述微量样本与所述单相提取溶剂的用量比为1mg:6μL;
所述部分上清液与所述单相提取溶剂的体积比为1:3。
3.根据权利要求1所述的前处理方法,其特征在于,在步骤2)中,
所述双相提取溶剂由体积比为5:1:10的甲醇、1M盐酸和氯仿组成;
所述微量样本与所述双相提取溶剂的用量比为1mg:16μL;
所述复溶溶剂为体积比为1:4的甲醇/异丙醇混合溶剂;
所述微量样本与所述复溶溶剂的用量比为1mg:2μL。
4.根据权利要求1所述的前处理方法,其特征在于,
步骤2)还包括在取出有机相和真空浓缩干燥之间进行的补充双相提取,包括:向取出有机相后剩余的残渣中加入补充双相提取溶剂,涡旋混匀,于冰浴中提取,低温离心,取出有机相,与双相提取后取出的有机相合并;其中
所述补充双相提取溶剂由体积比为1:2的甲醇和氯仿组成;
所述微量样本与所述补充双相提取溶剂的用量比为1mg:8μL~1mg:12μL。
5.根据权利要求4所述的前处理方法,其特征在于,
所述微量样本与所述补充双相提取溶剂的用量比为1mg:10μL。
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