[发明专利]一种石蜡切片样本核酸提取液及提取方法

说明书

本发明公开了一种石蜡切片样本核酸提取液，组分包括：5%~30%液态脱蜡剂、10~300mM的Tris‑HCl、1~100mM的EDTA、0.02~3%的LDS、0.05~3M盐酸胍、0.05~5%的N‑乙酰半胱氨酸、1～30mg/ml氯化钾、0.05～1M氯化钠、0.02～2M氢氧化钠、0.1～10%的曲拉通、0.1～5%的吐温20。本发明提供的核酸提取液可提供强碱环境促进细胞膜破裂核酸释放，同时LDS可有效去除蛋白等杂质，N‑乙酰半胱氨酸可降低样本黏稠度，协助细胞膜破裂，整个提取过程无需经过脱蜡、裂解液、洗涤、洗脱等繁琐操作，无需与离心机、提取仪等配合使用，操作简便，效率高，降低了提取成本。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，具体涉及一种石蜡切片样本核酸提取液及提取方法。

背景技术

福尔马林固定石蜡包埋组织作为一种最为方便的临床材料来源，常被用于大宗病例的回顾性研究。近年，随着众多与疾病诊断、预后及治疗相关的分子标记物的出现，以石蜡组织切片为材料进行分子水平的基因检测和筛查已成为临床诊断及相关研究的常规手段。对于各种基因分析方法而言，重要的是首先获得足够纯度和数量的核酸。

目前石蜡切片样本的核酸提取方法及试剂盒绝大部分还是以手工操作为主，整个操作流程比较繁琐且耗时在4个小时以上；有少部分采用含机械臂移液的自动化仪器提取，该仪器属于大型的自动化工作站，仪器成本较高，对于少量样本提取不适合；市场上目前使用较多的提取方法主要是采用离心柱提取法和小型化核酸提取仪提取法；离心柱和小型化核酸提取仪提取法，多数均需要经过脱蜡、裂解液、结合、洗涤、洗脱等步骤；离心柱提取法需要多次使用离心机进行离心，过程较为复杂，不能实现自动化提取；小型核酸提取仪的提取特点是通过磁棒的移动，将结合有核酸的磁珠转移至洗涤、洗脱等缓冲液体系中，最终实现核酸提取纯化的目的，但是小型自动化的机器通量小，且对于需要分步添加试剂的核酸提取方法不能应用于该机器上实现全自动化，需结合手动操作完成半自动提取，虽有一些提取方法已实现集脱蜡、裂解液结合一步的全自动化提取，但该方法仍存在一定的问题，如裂解液不充分、脱蜡不充分等原因造成提取效果差，且核酸孔位存在较多磁珠残留，从而导致下游检测失败，因此目前很多厂家对于石蜡切片样本核酸提取过程中的脱蜡和裂解步骤均采用手工机器结合的半自动化提取，操作过程繁琐不便。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种石蜡切片样本核酸提取液及提取方法，以便解决上述现有技术存在的问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种石蜡切片样本核酸提取液，包括以下质量份的组分：5%~30%液态脱蜡剂、10mM~300mM的Tris-HCl、1mM~100mM的EDTA、0.02%~3%的LDS（十二烷基硫酸锂）、0.05M~3M的盐酸胍、0.05%~5%的N-乙酰半胱氨酸、1mg/ml～30mg/ml的氯化钾、0.05～1M的氯化钠、0.02～2M的氢氧化钠、0.1%～10%的曲拉通、0.1～5%的吐温20。

优选地，所述质量份的组分为：10%~25%液态脱蜡剂、10mM~200mM的Tris-HCl、1mM~50mM的EDTA、0.1%~1%的LDS、0.5M~1M的盐酸胍、0.5%~2%的N-乙酰半胱氨酸、1mg/ml～10mg/ml的氯化钾、0.05～0.5M的氯化钠、0.02～1M的氢氧化钠、0.1%～2%的曲拉通、0.1～2%的吐温20。

本发明还提供了一种石蜡切片样本核酸提取方法，使用上述核酸提取液，包括：将石蜡切片样本去除周围多余石蜡放入无核酸酶的离心管中，加入所述核酸提取液，放入90℃～98℃恒温振荡孵育仪中振荡孵育20min~60min，中间澄清液即为所提取核酸，可直接取样进行下游PCR等检测。

优选地，所述方法为：将石蜡切片样本去除周围多余石蜡放入无核酸酶的离心管中，加入所述核酸提取液，放入95℃恒温振荡孵育仪中振荡孵育30min，中间层澄清液即为所提取核酸。