[发明专利]个性化基因修饰肿瘤DC疫苗的制备方法

权利要求书

1.个性化基因修饰肿瘤DC疫苗的制备方法，其特征在于：所述制备方法，包括筛选肿瘤患者的抗原位点；所述筛选肿瘤患者的抗原位点，包括全基因的突变位点的筛选和肿瘤标志物基因抗原表位的筛选；

将全基因的突变位点的筛选得到的突变多肽、肿瘤标志物基因抗原表位的筛选得到的肿瘤抗原表位进行连接，得到突变肽，在突变肽的N端连接MHC I类信号分子，在C端连接MHCI类转运信号MITD，MITD通过T2A与增强型细胞因子GM-CSF连接，得到重组抗原肽片段；

将全基因的突变位点的筛选得到的突变多肽、肿瘤标志物基因抗原表位的筛选得到的肿瘤抗原表位进行连接时，肿瘤抗原表位在前，突变多肽在后进行连接；

所述全基因的突变位点的筛选为对癌症患者进行全基因测序，根据全基因测序结果筛选出与该癌症患者所患癌相关联的错义突变的突变位点，查询各突变位点的上下游序列，得到突变多肽；

所述突变多肽的长度为25-35个氨基酸，突变位点位于其对应的突变多肽的氨基酸序列的1/3到2/3处；

所述肿瘤标志物基因抗原表位的筛选，对该癌症患者自身携带的其所患癌的肿瘤标志物基因对应的氨基酸序列，与病人的HLAI、HLAII进行匹配，根据匹配结果，选择%Rank值小于0.5且BindLevel为SW的肽段，筛选得到的肽段，如果有氨基酸重合的，将重合的肽段整合成一个肽段，如有相邻的两个肽段，间隔10个氨基酸以内，则将相邻的这两个肽段和中间间隔的氨基酸一起整合成一个肽段，得到肿瘤抗原表位。

2.根据权利要求1所述的个性化基因修饰肿瘤DC疫苗的制备方法，其特征在于：所述肿瘤标志物基因对应的氨基酸序列，与病人的HLAI、HLAII进行匹配，使用的软件为NetMHCpan、SYFPEITHI或免疫表位数据库。

3.根据权利要求1所述的个性化基因修饰肿瘤DC疫苗的制备方法，其特征在于：所述个性化基因修饰肿瘤DC疫苗的制备方法还包括重组表达载体的构建、腺相关病毒的包装、肿瘤DC疫苗制备；

所述重组表达载体的构建，将表达重组抗原肽片段的目的基因序列与载体连接，得到重组表达载体；

所述腺相关病毒的包装，将重组表达载体转染HEK293细胞，转染后使细胞充分裂解，得到腺相关病毒；

所述肿瘤DC疫苗制备，将腺相关病毒感染imDC，得到肿瘤DC疫苗。