[发明专利]一种影响肿瘤细胞干性的关键蛋白BLT2及其应用

说明书

本发明公开了一种影响肿瘤细胞干性的关键蛋白BLT2及其应用。本发明通过体外共培养实验发现5‑LO的上调导致LTB4分泌增加，还可以进一步通过ICC细胞的BLT2信号增强ICC细胞系的干性基因表达，且BLT2的表达水平与ICC病人的预后生存率显著负相关(P＜0.001)，BLT2低表达组病人的预后生存率要显著高于BLT2高表达组。在体外利用BLT2的抑制剂抑制BLT2信号可以显著降低5‑LO上调导致的ICC干性基因表达。而常规化疗与BLT2抑制剂联用可以显著抑制人源化肿瘤异体移植小鼠的肿瘤生长。

技术领域

本发明涉及一种影响肿瘤细胞干性的关键蛋白BLT2及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

人肝内胆管细胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)作为胆管上皮细胞恶性转化导致的原发性肝癌，其诊断的困难性和临床的不良预后严重影响病人的术后生存率，其发病率虽然只占肝癌数量的5％左右，然而其恶性程度非常高，病人死亡率很高，5年的生存率仅有25％，因此研究其相关发生发展的机制尤为重要。该疾病的特点是高度纤维化和结缔组织增生，此前大量的研究都认为肿瘤微环境其中特别是成纤维细胞对该疾病的发生发展都起到了重要的作用，与其不良的预后和高恶性程度密不可分。

肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞，其主要具有自我更新和无限繁殖能力。其对肿瘤的存活、增殖、转移及复发具有重要的意义，这类肿瘤干细胞既像干细胞一样处在不同的分化阶段，同时又具有极强的成瘤能力。肿瘤微环境作为恶性肿瘤无限增殖的温暖摇床，包括肿瘤细胞、免疫细胞以及细胞外基质中的各种细胞等都参与肿瘤微环境的形成过程。而这些细胞之间的相互作用是否参与调控肿瘤细胞的干性尚不可知。

肿瘤免疫治疗的过程中，疗效和患者体内的免疫抑制效应有着很大的关系，而在其中起关键作用的是一群具有免疫抑制效应的骨髓来源细胞即髓样抑制细胞(MDSCs)。现有的文章表明，MDSCs来源于未成熟分化的造血干细胞，又基于表达的Gr-1抗原不同表位分为了多核型粒细胞亚群(PMN-MDSCs)和单核型细胞亚群(Mo-MDSCs)。一些不成熟的髓样来源细胞的浸润是肿瘤发生的另一特征。肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和髓样抑制细胞是实体瘤中发现的最主要的两种细胞，它们有共同的特点功能，即抑制T细胞的杀伤肿瘤功能。在肿瘤的发生过程中，MDSCs受到肿瘤细胞分泌的一系列细胞因子影响，包括环氧合酶 2(COX-2)、前列腺素(prostaglandins)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、白介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)等，最终活化，分泌精氨酸酶1 (Arg1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)来发挥抑制T细胞的功能。除了他们的免疫抑制功能，TAMs和MDSCs通过各种途径促使肿瘤恶化，包括促肿瘤血管新生，促肿瘤细胞干性，以及上皮间质转化等等。CD163⁺TAMs具有M2型巨噬细胞的表型，有文献证明他们在ICC发病的连续性中表现出了不良预后的趋势。而MDSCs在多种类型的人类实体瘤中，比如卵巢癌、乳腺癌和肝细胞癌，都有检测到，但ICC病人当中MDSCs的作用尚不明确。

ICC相关的肿瘤微环境有大量MDSCs的存在。除了已经被研究充分的免疫抑制功能外，近期数据还表明，MDSCs能够通过旁分泌信号传导和诱导癌细胞的表观遗传程序来促进癌症干性和化疗耐药性。最近的研究表明，MDSCs的代谢变化与其功能状态即免疫抑制活性有关。Veglia F等人报道了肿瘤浸润性 PMN-MDSCs中花生四烯酸(AA)代谢增加，这通过下游PEG2影响了它们的免疫抑制功能。值得注意的是，一项较早的研究表明，5-脂氧合酶(5-LO)是 AA代谢通路下游白三烯(LT)合成的关键酶，介导嗜中性粒细胞支持高度转移性细胞的能力，从而导致小鼠乳腺癌模型中的肺转移。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：人肝内胆管细胞癌诊断困难、预后生存率较差以及常规化疗药物会产生耐药性而影响化疗效果等问题。