[发明专利]一种用于老年痴呆病血清中A-beta含量的检测方法

说明书

本发明公开了一种用于老年痴呆病血清中A‑beta含量的检测方法，涉及全血样本检测技术领域。本发明的步骤为用聚乙烯滴管吸取生理盐水洗脱指尖血，滴入血液样本收集管中；吸取结合缓冲液滴入血液样本收集管；取无菌注射器吸取处理好的血液样本到样本收集管中；用新的聚乙烯滴管将样本收集管中加入蛋白聚集生物反应液和ThT溶液；混合的样品盖好盖子，反复上下颠倒十次以充分混匀，之后静置于温水中；将反应后的液体滴入POCT荧光检测仪的样品孔中，读取RFU值。本发明通过使用POCT荧光检测仪、结合便携式新型分离纯化系统，对全血样本中的A‑beta进行分离纯化，使待测血液样本能够通过POCT检测A‑beta蛋白聚合物的含量，进而判断出病人老年痴呆病情程度。

技术领域

本发明涉及全血样本检测技术领域，具体为一种用于老年痴呆病血清中 A-beta含量的检测方法。

背景技术

阿尔兹海默症(老年痴呆病)是影响中老年人健康的一种严重、致死性中枢神经系统疾病。在老年痴呆病患者的血液中，长短不同的短肽家族(含 A-beta40、A-beta42、A-beta38、A-beta32、A-beta56等)容易聚集形成富含Beta片层构象的蛋白聚合体，该聚合体可通过硫黄素T(ThT)结合激发荧光。荧光强度(RFU)变化预示着血液中Beta片层构象的多寡、以及疾病病程的改变。

但是现在并不存在相应的工艺进行检测，为此，我们研发了一种用于老年痴呆病血清中A-beta含量的检测方法。

发明专利内容

本发明专利的目的在于提供一种用于老年痴呆病血清中A-beta含量的检测方法，通过使用POCT荧光检测仪、结合便携式新型分离纯化系统，对全血样本中的A-beta进行分离纯化，使待测血液样本能够通过POCT检测A-beta蛋白聚合物的含量。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于老年痴呆病血清中 A-beta含量的检测方法，所述方法包括以下步骤：

指尖血取样针刺破指尖；

用聚乙烯滴管吸取0.5毫升150mM NaCl生理盐水洗脱约250ul指尖血，滴入血液样本收集管中；

取另一支聚乙烯滴管吸取0.2毫升结合缓冲液滴入血液样本收集管，吹打三次以匀浆；

将血液样本收集管在10-35摄氏度环境下静置10分钟；

取无菌注射器吸取处理好的血液样本到样本收集管中；

用新的聚乙烯滴管将样本收集管中加入0.2ml蛋白聚集生物反应液和0.2 ml ThT溶液；

混合的样品盖好盖子，反复上下颠倒十次以充分混匀，之后静置于温水中 2-3小时；

将1ml反应后的液体滴入POCT荧光检测仪的样品孔中，打开机器，读取 RFU值。

进一步的，所述结合缓冲液的成分配比为：

50mM Tris.HCl、50mM KH2PO4、0.5％Tween20中性表面活性剂、2 IUBenzonase核酸酶。

进一步的，上述中，取无菌注射器吸取处理好的血液样本到样本收集管中，主要包括：

将0.45微米无菌滤膜套上无菌注射器，轻推注射器，使液体样本流过滤膜，流出的液体用血液样本收集管收集；

取一支新的无菌注射器和新的样本收集管，吸入处理好的全部血液样本，再将无菌注射器套上滤柱，轻推注射器，使液体样本缓缓流过滤柱，丢弃流出来的前5滴液体样品，收集第6至第10滴样品到新的样本收集管。

进一步的，所述滤柱为Gel-filtration凝胶柱。

进一步的，所述温水不超过50摄氏度。