[发明专利]抗TIM3蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人TIM3抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案化学合成TIM3蛋白C末端的178‑201位氨基酸为抗原肽，偶联KLH后得到免疫原。所述TIM3‑KLH蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗TIM3蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株7H2,以及由该细胞株所分泌的抗TIM3蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达TIM3蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗TIM3蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤严重影响人类健康，目前肿瘤的治疗手段包括放疗、化疗及分子靶向性治疗。细胞免疫系统对肿瘤细胞的杀伤过程包括:肿瘤细胞的识别、肿瘤抗原被呈递给T细胞、T细胞激活及特异性杀伤肿瘤细胞。在这个过程中，T细胞的激活需要协同刺激信号，而这些信号需要“免疫检查点”的调控，“免疫检查点”分子研究较多的有:T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、程序性细胞死亡因子-1(PD-1)及其配体(PD-L1)等，它们在肿瘤微环境的免疫调节中起重要作用。

TIM3(T细胞免疫球蛋白黏液素3，T cell immunoglobulin and mucin-3)在2002年第一次被发现，TIM3是TIM家族成员，由301个氨基酸组成的Ⅰ型膜蛋白。TIM分子的共同结构包括:免疫球蛋白N末端可变区、黏蛋白结构域、跨膜区和胞内区。其胞外部分包括一个富含半胱氨酸的免疫球蛋白样区域和一个黏蛋白区域(黏蛋白区富含苏氨酸、丝氨酸和脯氨酸)，在免疫球蛋白可变区由4个半胱氨酸组成的高度保守的不同于其他免疫球蛋白超家族成员的独特裂隙:它可以与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。TIM3选择性地表达在分泌IFN-γ的T辅助细胞(Th1和Th17)、T调控细胞(Treg)、树突状细胞(DCs)、单核细胞、肥大细胞、NK细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)上，在肿瘤细胞上亦有表达，如黑色素瘤、胃癌、B细胞淋巴瘤。

发明内容

发明人提供了一种抗TIM3蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别TIM3蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG₁亚型单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 20763的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗TIM3蛋白单克隆抗体的制备方法，选取TIM3蛋白中SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列(第178位至第201位),在其羧基端添加了一个半胱氨酸后，与载体蛋白KLH进行偶联作为免疫原。

发明人还提供了一株分泌抗TIM3蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株7H2，所述细胞株已于2020年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 20763，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

发明人还提供了上述单克隆抗体在TIM3蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。