[发明专利]一种非洲猪瘟病毒核酸免提取三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种核酸免提取的非洲猪瘟病毒B646L、MGF505‑2R和CD2v三基因荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒，属于分子检测技术领域。本发明针对非洲猪瘟病毒的B646L、MGF505‑2R和CD2v基因分别设计了三组引物和探针，同时结合核酸免提取方法，极大缩短了整个检测过程的时间，实现了非洲猪瘟病毒核酸的快速检测，可用于鉴别区分MGF505‑2R和CD2v基因双缺失或单缺失的毒株，该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。临床应用显示，该方法和OIE推荐方法的检测结果符合性和相关性良好，具有重要的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一种用于鉴别检测非洲猪瘟病毒B646L、MGF505-2R和CD2v三基因的核酸免提取荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒，属于分子检测技术领域。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起猪的一种高度接触性传染性疾病，临床上以急性、热性、出血性、高发病率和高死亡率为主要特征。目前在非洲、亚洲和中东欧地区呈流行态势，严重威胁着世界养猪生产。自2018年8月，非洲猪瘟传入我国以来，给我国生猪产业带来了毁灭性的打击，各种因素影响下造成生猪和猪肉价格偏高，高峰时是我国往常年份正常价格的3倍左右。尽管通过生物安全的全面提升和精准剔除技术的应用，我国生猪产能得到了一定恢复，但非洲猪瘟在我国流行两年多来，已出现一些新的情况，如基因缺失毒株和变异毒株的出现流行等，使得我国非洲猪瘟的流行情况更为复杂。农业农村部在2021年3月8日发布了《关于进一步严厉打击非洲猪瘟假疫苗有关违法行为的通知》，其中要求要强化基因缺失毒株的鉴别检测。因此，急需开发出一种快速、特异和敏感的针对非洲猪瘟病毒B646L、CD2v和MGF505-2R基因的荧光定量检测方法，从而为非洲猪瘟病毒的临床鉴别检测提供技术支撑。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种用于快速鉴别检测非洲猪瘟病毒B646L、CD2v和MGF505-2R基因的核酸免提取三重荧光定量PCR检测组合物、方法及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于检测非洲猪瘟病毒B646L、MGF505-2R、CD2v基因的核酸免提取三重荧光定量PCR检测组合物，由B646L基因的上游引物B646L-F、下游引物B646L-R和探针B646L-P；MGF505-2R基因的上游引物MGF505-2R-F、下游引物MGF505-2R-R和探针MGF505-2R-P；CD2v基因的上游引物CD2v-F、下游引物CD2v-R和探针CD2v-P组成；

所述引物和探针的序列如下：

上游引物B646L-F：GGGTGCATGTCATTCATCCT；

下游引物B646L-R：GTCATATCCGTTGCGAGGAA；

探针B646L-P：FAM-AGGATGCTCCGATTCAGGGCACGTCCCA-BHQ1；

上游引物MGF505-2R-F：AGCTCTTGTTACTGTGGAAGG；

下游引物MGF505-2R-R：AAAACGTTCTAAAGCGTGGC；

探针MGF505-2R-P：VIC-ACGCCGTCATAGGAGCCTTGCAGGGTGA-BHQ1。

上游引物CD2v-F：AGAAATAGAAAGTCCACCACCTGAA

下游引物CD2v-R：TCATGTATGGAAGTGGTGTCATCA

探针CD2v-P：CY5-CTAATGAAGAAGAACAATGTC-MGB。

一种包含所述检测组合物的三重荧光定量PCR检测试剂盒。